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水溶性高分子保护的Lipofectamine2000/DNA复合物的 固相转染研究 张 桥 黄书文 鄢国平 武汉工程大学材料科学与工程学院，湖北武汉， 430074 固相转染系统也称基质介导传递系统，即用高分子支架负载DNA，在高分子支架支持 细胞贴壁生长的同时通过高分子的降解来控制释放DNA或载体/DNA复合物1。基质介导 传递系统可以实现对靶组织的局部基因转染，避免其对非靶组织的毒性，防止DNA被快速 清除，维持局部DNA的浓度2。由于在制备固相转染系统时需要先制备载体/DNA复合物， 并将其负载于基质上干燥、保存，这个过程可能会使DNA失活。因此通常基质介导的基因 转染效率低于在溶液中的转染效率。添加水溶性添加剂，如一些带羟基的糖类和带羧基的氨 基酸，能保持干燥的DNA的活性并有助于DNA复合物从基质中分离从而增强基因表达水 平3。我们用一种具有快速降解和表面浸蚀机理的胆酸功能化的星型聚 （DL-丙交酯）作为基 质来负载Lipofectamine2000/DNA复合物4，并用一种可降解且生物相容性好的水溶性高分 子α，β-聚(2-羟乙基)-L-天冬酰胺(PHEA)来保护Lipofectamine2000/DNA复合物增强基因 转染的活性。研究结果表明，PHEA对增强Lipofectamine2000/DNA复合物的固相转染具 有很重要的作用，使其转染效果达到在溶液中转染的效果。 主题D生物医用高分子材料 2012年10月16日一20日中国·武汉 l还是添加PHEA的 基因表达。结果如图Fi鲫№2所示，无论是没有添加PHEA的film film 2，在放置一个星期后，转染活性都下降了。但是添加PHEA的膜下降的比例较低，而 且即使是放置了一个星期，它的转染活性依然高于新制备的没有添加PHEA的活性。这说 2000／DNA复合物的稳定 明，在膜的制备和保存过程中，PHEA有利于保护Lipofect锄ine 性。 O 0S J l 5 ： ：S PHEA∞n嘲ltlh瞎} 1．E行酏tofPHEAcont跚tonlucifler弱e 293Tcellsweretransfccted FiguM expression．The withdi仃erentPHEAamounts矗w48h． 2000／DNA filIIls byLipofect锄inecomplexesd印osited 二I．I=lLIE}lO 重 。 厶 爹1·‘盼09 盈 1．(I(IBp(曝 l 00导p07 in293Tcelsmediated 1 2before姐d Figu№2．LucifeII鹤eexpression by(a)filmand(b)filIIl after for1week． storage 实验结果表明添加水溶性高分子PHEA可以有效保持pGL3．Luc质粒的转染活性并显 著提高了其对293T细胞的固相转染效率，使固相转染效率接近在溶液中转染效率。 WaterSolublePolymerProtectedLipofectamine2000/DNA ComplexesforS