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第一章 分离过程: 通过一定的手段，将混合物分成互不相同的几种产品的操作过程，它包括提取和除杂两部分 分离手段: 物理 化学 或者是物理和化学手段的互相 结合 分离技术: 是一门研究如何从混合物中把一种或几种物质分离出来的科学技术。 第二章 沉淀的概念: 指溶液中的溶质在适当条件下由液相变成固相而析出的过程。 结晶是一种特殊的沉淀技术。 沉淀分离方法种类： 1.无机沉淀剂沉淀分离法, 通常是以盐类作为沉淀剂的一类沉淀方法如盐析法，多用于各种蛋白质和酶类的分离纯化，以及某些金属离子的去除。 常用的沉淀剂有：硫酸铵、碳酸铵、硫酸钠、柠檬酸钠、氯化钠等。 2.有机沉淀剂沉淀分离法, 以有机溶剂作为沉淀剂的一种沉淀分离方法。常用到的沉淀剂有：丙酮、乙醇、甲醇等 3.非离子多聚体沉淀剂沉淀分离法, 采用非离子型的多聚体作为目标成分的沉淀 剂。适用于生物大分子的沉淀分离，如酶、核酸、蛋白质、病毒、细菌等。 4. 等电点沉淀法主要是利用两性电解质在等电点状态下的溶解度最低而沉淀析出的原理。适用于氨基酸、蛋白质及其他属于两性电解质组分的沉淀分离，如大豆蛋白“碱提酸沉”的提取方法。 5.共沉淀分离法又可称为生物盐复合物沉淀法，用于多种化合物特别是一些小分子物质的沉淀。它是利用沉淀的同时对其他待分离成分吸附共沉淀而达到除杂的目的。 6. 变性沉淀分离法又称为选择性变性沉淀法，是利用特定条件使目标成分变性，导致其性质的改变如溶解度下降而得以分离。适用于一些变性条件差异较大的蛋白质和酶. 第二节 金属盐类沉淀分离法此种方法利用金属离子与酸根在形成盐类时溶解度低而沉淀分离。在柠檬酸发酵工业中应用得较多的是钙盐法。原因： 柠檬酸的钙盐溶解度比较小，易于分离； 其次钙离子的来源(石灰)广泛，价格便宜，并且钙离子对食品造成污染少。 工业上柠檬酸的生产采用的钙盐沉淀法过程分钙盐中和及酸解两个步骤。 1．钙盐中和 发酵液去除菌体后，加入碳酸钙，形成柠檬酸钙沉淀，柠檬酸得以与发酵液的其他杂质分离： 2C6H8O7·H2O+3CaCO3(Ca3(C6H5O7)·4H2O ( +3CO2+ H2O 条件：70-85℃，pH5.0 2.酸解 得到的柠檬酸钙用硫酸处理，使之生成硫酸钙沉淀，钙和柠檬酸分离: C3(C6H5O7)·4H2O + 3H2SO4 + 4H2O(2C6H8O7.H2O+3CaSO4.H2O 条件：60-85℃，pH1.8-2.0 在蔗糖生产过程中，也有利用生成碳酸钙沉淀或亚硫酸钙沉淀来进行糖的除杂和澄 清。 谷氨酸能与Zn2+、Ca2+、Co2+、Cu2+等作用生成谷氨酸盐沉淀，也可用于从发酵液中分离谷氨酸。其中利用Zn2+进行沉淀的称为锌盐法(条件为常温温度，pH值为6.3) ；利用Ca2+进行沉淀 的称为钙盐法(常温温度，pH值为12.0)。 缺点：常有共沉淀作用和吸附作用发生，并且一些金属盐(如硫酸钙)的溶解度也比较大，残留问题严重。因此分离效果不是很理想，用作初步分离，并且通常是与其他分离方法配合使用。 盐析法原理 盐溶:在低盐浓度下，蛋白质和酶类的溶解度随着盐的浓度提高而增大，这个过程称为盐溶。原因： （1）无机盐离子在蛋白质表面吸附，使颗粒带相同电荷而互相排斥。 （2）无机盐离子增加了蛋白质的亲水性， 改善了与水膜的结合，增加了蛋白质分子与溶剂分子相互的作用力，使蛋白质的溶解度增加。 盐析：当盐浓度增加到—定程度时，在盐离子的作用下，水活度大大降低，同时蛋白质表面 的电荷被大量中和，蛋白质分子外表的水化膜被破坏，蛋白质分子相互聚集而沉淀析出。 在盐析法中常用到的中性盐有： 硫酸铵、硫酸钠、硫酸镁、磷酸钠、磷酸钾、氯化钾、醋酸钠、硫氰化钾等。 以硫酸铵、硫酸钠应用最广。虽然磷酸盐的盐析效果比硫酸铵好． 但硫酸铵的最大优点： 1.温度系数小2.温度的变化引起溶液性质的改变不大， 3.溶解度大，应用于许多蛋白质和两的盐析时，对蛋白质和酶变性的影响较小4.并且硫酸铵价格低廉。 1.硫酸铵的缺点：缓冲能力较小2.含氮，影响到蛋白质的定量分析．尤其是采用凯氏定氮法和双缩法进行测定时 硫酸钠由于不含氮，不影响蛋白质的定量测定，归其缺点是在30℃以下溶解度太低，需在30℃以上操作效果较好，不利于保持酶的活性。磷酸盐、柠檬酸钠、硫氰化钾等也用于蛋白质的盐析，但由于溶解度低．或容易与其他金属离子产生沉淀，或因酸性过强，都不如硫酸铵的应用那样广泛。 影响盐析效果的因素 (1)蛋白质浓度的影响(2)离子强度和离子类型的影响(3)不同离子类型对盐析效果的影响 (4)pH值对盐析效果的影响 (5)温度的影响 盐析后的脱盐处理 常用的脱盐处理方法有： 1.透析法2.电渗析法3.葡聚糖凝胶过滤法 透析法：半