5生化标志物与临床.ppt

琼脂糖凝胶电泳分析血清CK同工酶可能出现的酶带 （二）层析法 离子交换层析和亲和层析等常用于同工酶的提纯与制备，也可用于临床同工酶常规检测。 同工酶分子荷电量不同是离子交换层析法分离的基础，常用的离子交换剂有二乙氨基乙基纤维素(DEAE-C)、二乙氨基乙基葡聚糖A-50(DEAE-Sephadex A-50)、二乙二羟丙氨乙基葡聚糖A-50(QAE-Sephadex A-50)等。 （三）免疫分析法 由于同工酶的一级结构不同，因而免疫化学性质也不同。利用纯化的同工酶免疫动物制备特异性的抗血清，此抗体只与该同工酶产生特异性免疫反应。因此，抗原决定簇不同的同工酶可用特异的免疫反应来识别。应用较多的免疫分析法有免疫抑制法、免疫沉淀法等。 （四）同工酶的其他分析方法 1. 底物专一性分析法 不同的同工酶底物专一性不同，Km值也不同，如同工酶之间Km差别足够大，可通过测定其Km值加以鉴定。（例：AST） 2. 选择性抑制法 同工酶各亚型对抑制剂敏感程度不同，或同一抑制剂对不同同工酶有不同的抑制作用。（例：前列腺释放的酸性磷酸酶ACP） 3. pH分析法 不同同工酶可有不同的最适pH，如同工酶之间最适pH差别足够大，可通过调节缓冲液pH，使待测同工酶维持完整活性的同时，其它同工酶活性受到抑制。 4. 热失活分析法 利用不同同工酶的耐热性不同进行分析与鉴定。（例：CK） 一、血清酶 （一）血清酶的来源与去路 1.血清酶的来源 2.血清酶的去路 血清酶的半寿期是指酶失活至原来活性一半时所需时间（T1/2），一般以半寿期来代表酶从血中清除的快慢。 细胞酶 外分泌酶 非血浆特异酶 血浆特异酶 血清酶 在血浆中发挥特定的催化作用的酶 来源于消化腺或其他外分泌腺的酶 存在于各组织细胞中进行代谢的酶类 第三节 常用酶及同工酶测定的临床应用 血清酶半衰期与分子量 酶 半寿期 相对分子量 ALT 37～57h 110 000 AST 12～22h — ASTs 约14h 120 000 ASTm 约6h 100 000 CK 约15h — CK1(CK-BB) 约3h 88 000 CK2(CK-MB) 约10h 87 000 CK3(CK-MM) 约20h 85 000 LD — — LD1 53～173h 135 000 LD5 8～12h 135 000 ALP 3～7d 120 000 肠ALP 1h — 骨ALP 约40h — 胎盘ALP 约170h — GLD 约16h 350 000 AMY 3～6h — LPS 3～6h 48 000 ?-GT 3～4d — （二）血清酶的生理差异 1.性别 多数血清酶男女差异不大，但有些酶：CK、ALP及?-GT等有性别差异，年轻女性因含雌激素较多，血清LD1 含量明显高于老年女性和各年龄段男性。 2.年龄 新生儿血清中ALP略高于成人CK在出生后24h内可达成人的3倍，1~12岁内保持较稳定的水平，青春期再增高，以后逐渐降低，直至20岁后趋向恒定。 3.进食 血清中大多数酶不受进食的影响。但高脂、高糖饮食后血清ALP活性升高。而酗酒可使血清?-GT升高，禁食数天可导致血清AMY下降。 4.运动 激烈的肌肉运动可使血清中多种酶活性升高；长时间剧烈运动，血清酶活性升高幅度最大；短时间剧烈运动后，血清AST升高出现的时间最早，当运动停止后，酶活性逐渐下降，其中ALD和CK恢复最快，AST和LD次之，而ALT最慢 。 5.妊娠 妊娠时随着胎盘的形成和长大，胎盘组织可分泌一些酶进入母体血液，如耐热ALP、LD、LAP和ALT（少数）等，引起血清中这些酶升高。 6.其他 血清中有些酶与同工酶有种族差异，此外，一些酶活性还与体重、身高的增长、体位改变、昼夜变化及家庭因素等有关。 （三）血清酶的临床应用 部分疾病血清酶水平的改变 血清酶 酶水平的改变 病毒性肝炎 胆管 阻塞 肌营养障碍 急性心肌梗死 急性胰腺炎 肿瘤转移到 其他 肝 骨 胆碱酯酶 ↓↓ -或↓ - - - ↓↓ - 有机磷化合物中毒 丙氨酸转氨酶 ↑↑↑ ↑ -或↑ -或↑ - ↑ - 天冬氨酸转氨酶 ↑↑↑ ↑ ↑ ↑↑ - ↑↑ - 碱性磷酸酶 ↑ ↑↑↑ - - - ↑↑ ↑↑↑ 骨疾病，骨折 酸性磷酸酶 - - - - - - -或↑ 前列腺癌 乳酸脱氢酶 ↑ ↑ ↑↑ ↑↑ - ↑↑↑ -或↑ 巨成红细胞性贫血 肌酸激酶 - - ↑↑↑ ↑↑ - - - 脂酶 - - - - ↑↑↑ - - 小肠穿孔 淀粉酶 - - - - ↑↑↑ - - γ-谷氨酰转移酶 ↑ ↑↑↑ - - - ↑↑ -