PCR扩增检测转基因大豆、玉米.pdf

  1. 1、本文档共25页,可阅读全部内容。
  2. 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
PCR扩增检测转基因大豆、玉米 PCR扩增检测转基因大豆、玉米 【实验目的】 【实验目的】 通过PCR扩增方法检测市场常见大豆、玉米 通过PCR扩增方法检测市场常见大豆、玉米 产品是否含有转基因成分 产品是否含有转基因成分 培养学生的实验设计能力和创新能力 培养学生的实验设计能力和创新能力 【实验原理】 【实验原理】 以大豆特异性内源基因大豆凝集素(Lectin) 以大豆特异性内源基因大豆凝集素(Lectin) 基因或者玉米特异性内源基因IVR为内参, 基因或者玉米特异性内源基因IVR为内参, 花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S启动 花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S启动 子) 、农杆菌胭脂碱合成酶终止子(NOS终止 子) 、农杆菌胭脂碱合成酶终止子(NOS终止 子)及外源基因5-烯醇丙酮-莽草酸-3-磷酸合酶 子)及外源基因5-烯醇丙酮-莽草酸-3-磷酸合酶 (CP4-EPSPS)基因为靶基因检测大豆和玉米中 (CP4-EPSPS)基因为靶基因检测大豆和玉米中 的转基因成分。 的转基因成分。 【实验步骤】 【实验步骤】 大豆、玉米DNA 提取--改良的CTAB法 大豆、玉米DNA 提取--改良的CTAB法 称取0.1g样品,在研钵中充分研磨。加入1000 μL CTAB提取 称取0.1g样品,在研钵中充分研磨。加入1000 μL CTAB提取 液,继续研磨充分后加入到1.5mL Ep 管中;向EP 管加入4 μL 液,继续研磨充分后加入到1.5mL Ep 管中;向EP 管加入4 μL RNaseA ,至于65℃水浴,过程中混匀3~5 次,30min , RNaseA ,至于65℃水浴,过程中混匀3~5 次,30min , 12000r/min室温离心10min;取上清于新的Ep管中,加入等体积 12000r/min室温离心10min;取上清于新的Ep管中,加入等体积 氯仿:异戊醇(24: 1) ,轻缓颠倒数次(或至于漩涡震荡器上混 氯仿:异戊醇(24: 1) ,轻缓颠倒数次(或至于漩涡震荡器上混 匀) ,室温静置5min,室温12000r/min离心10min;重复加入氯仿 匀) ,室温静置5min,室温12000r/min离心10min;重复加入氯仿 异戊醇一到两次 (过程中如上清液量太少,可适量加入三重蒸馏 异戊醇一到两次 (过程中如上清液量太少,可适量加入三重蒸馏 水) ;取上清于新的Ep管(千万不要吸入下层液体) ,再加入等体 水) ;取上清于新的Ep管(千万不要吸入下层液体) ,再加入等体 积的CTAB沉淀液,轻缓颠倒混匀后室温静置1h,15000 r/min室 积的CTAB沉淀液,轻缓颠倒混匀后室温静置1h,15000 r/min室 温离心10min;弃上清液,加入400 μL 1.2mol/L 氯化钠溶解沉 温离心10min;弃上清液,加入400 μL 1.2mol/L 氯化钠溶解沉 淀,56℃温浴15min,期间轻摇EP 管数次助溶;加入800 μL - 淀,56℃温浴15min,期间轻摇EP 管数次助溶;加入800 μL - 20 ℃无水乙醇,-20 ℃静置1h,15000 r/min室温离心10min;弃上 20 ℃无水乙醇,-20 ℃静置1h,15000 r/min室温离心10min;弃上 清液,用75% 乙醇洗涤沉淀两三次后,在室温下自然风干用三重 清液,用75% 乙醇洗涤沉淀两三次后,在室温下自然风干用三重 蒸馏水溶解储存于4 ℃。 蒸馏水

文档评论(0)

xiexie2012 + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档