血清总胆固醇含量的测定 .docVIP

酶法(GOD -PAP法)测血清葡萄糖 实验目的 熟悉酶法测定血液中葡萄糖糖浓度的原理 掌握测定血糖的意义 实验原理 本方法采用两种酶（GOD：葡萄糖氧化酶；POD：过氧化物酶）测量葡萄糖含量，具体反应如下： 葡萄糖 ＋ O2葡萄糖酸 ＋ H2O2 H2O2 ＋ 4-氨基安替比林＋酚醌亚胺染料(红色) ＋ H2O 醌亚胺染料在500nm处有吸收峰，其颜色的深浅与葡萄糖的浓度成正比。实验时采用已知浓度的葡萄糖溶液作标准管，经反应测定A标，待测样品在同样条件下反应后测定AX，这样可计算得到样品中葡萄糖浓度。 本法测得人血糖的正常值约为3.9一6.1mmol/L。 仪器设备 各类分光光度计，自动生化分析仪均可 学生实验仪器一套 试剂 1．酶试剂：葡萄糖氧化酶(G0D)＞1200U 过氧化物酶 (PAP)＞1200U “U”是酶的活性单位 4—氨基安替比林0．8mmol/L 2．磷酸缓冲液pH7．2 3．葡萄糖标准液：100mg／dL(5.55mmol/L) 实验操作 1．酶工作液配制： 酶试剂与缓冲液根据标本量，临用前按体积比1﹕4混匀，2—8℃可保存一个月。 2．标本处理： 抽取全血37℃保温5分钟，3000转离心10分钟，取上清液备用。 3．取小试管3支编号，按下表操作： 试管号 加入试剂 空白管 标准管 待测管 标准葡萄糖 (μL) — 10 — 待测血清 (μL) — — 10 酶工作液 (mL) 1.5 1.5 1.5 说明： ①理论上1号管应再加入10μL蒸馏水才能与其它各管溶液体积一致，但是10μL体积对总体积影响很小，故不精确加入亦可。 ②酶工作液的体积视当时的反应条件而定，此为建议值。总之使反应后的红色溶液吸光度值适当(A值在0.2到0.5之间)即可。 ③10μL液体不易精确加入，实验时要仔细检查移液枪的密封性。此外，移液枪外壁沾有的少许残留液体也要用滤纸小心吸干。 各管加好后，混匀，置37℃水浴10分钟，0.5cm光径比色杯在500nm波长下比色(722型分光光度计)。 计算 CX ：血清中葡萄糖浓度； C标：标准液中葡萄糖浓度 AX ：待测管吸光度； A标：标准管吸光度 AX/ A标= CX/ C标(因每一管中加入的其它试剂体积一致) CX = C标· AX/ A标代入已知数据即得。 注意事项 1．标准液吸取后应立即上盖，以防水分挥发 。 2．液体混浊或有絮状物视为失效。 3．本法特异性高，维生素C，谷胱甘肽，左旋多巴引起负偏差。 思考题 1．正常人的血糖为什么能维持在一定水平? 2．胰岛素和肾上腺素对血糖有何影响?为什么? 3．本试验测定血糖的基本原理是什么?在那些情况下需做血糖含量的测定? 1