miRNA 及其荧光定量PCR检测.pdf

microRNA 及其 Real time PCR检测 北京康为世纪生物技术有限公司 microRNA, A hot zone of research! 2009年 2010年 microRNA microRNA （miRNA） – 长度20～24nt单链小分子RNA – 广泛存在于各种真核细胞中 – 不编码任何蛋白质 – 其基因常位于基因组非编码区 – 内源性表达，表达具时序性和组织特异性。 – 与目标基因mRNA相互作用，调控其表达水平 – 在细胞生长、发育、分化、死亡等生物过程中起着重要的作用 分子功能 • ∼22 nt 单链小RNA • 与目标基因3’端非编码区的识别位点相结合 • 导致目标基因mRNA分子稳定性下降，半衰期变 短，或mRNA分子结构变化 （5‘脱帽），从而表 达水平下降 miRNA作用靶点 mRNA 5’cap 编码区 AAAAAAAA 3’ microRNA 的来源 miRNA前体与成熟体 microRNA 识别靶点 – 不严格互补配对 • 一个miRNA可调节多个 基因 • 一个基因可受多个 miRNA调控 • 60%人类蛋白基因受 miRNA调控 miRNA 与siRNA的异同 • 分子形式无区别，都是由Dicer产生的~22nt 小分子 • 分子功能近似，都导致目标基因表达水平 下降。但通常siRNA效果更剧烈 • 产生来源不同。 – miRNA有其基因，内源性表达 – siRNA多数情况下为人工外源导入 miRNA siRNA 命名规则– microRNA成熟体 命名规则– microRNA成熟体 • 传统名字：如let7 • 家族成员：加a，b, c…后缀，如let-7a • 主要产物：种名-miR-序号,如，has-miR-56 • 次要产物：加星号后缀，如，has-miR-56* • 主次不明：以5’或3’端区分，如，miR-142- 5p (5‘ 端产物) 和miR-142-3p (3’端产物 arm) (老命名miR-142-s and miR-142-as. ) miRNA分子功能总结 • 以非严格互补配对方式识别靶基因3’端非翻译区， 只有~8nt的种子区 （seed region ）严格互补配对。 • 一种miRNA分子可以不同威力调控多个靶基因， 通常导致靶基因mRNA稳定性降低及其它翻译水 平的表达下降 （如，脱帽）。通常不导致mRNA 剧烈降解。 • 有个别报告miRNAs与5‘端非翻译区结合导致靶 基因上调表达。 • 在植物中miRNA的分子功能可与siRNA相似，与 目标靶点严格互补配对，导致目标基因mRNA分 子急剧降解。 权威数据库miRBase 2010年初数据库 （v.14 ）包括 物种：115 人miRNA：721 小鼠miRNA: 579