乙二胺-N，N’-二邻氨基苯甲酸与牛血清白蛋白作用的荧光光谱研究.pdfVIP

第 27卷，第 2期 光 谱 实 验 室 Vo1．27，No．2 2010年 3月 ChineseJournalofSpectroscopyLaboratory March ，20 10 乙二胺一Ⅳ， 一二邻氨基苯甲酸与牛血清 白蛋白 作用的荧光光谱研究 冯姣 王璩琳 杨斌盛① (山西大学分子科学研究所 太原市坞城路 92号 030006) 摘 要 在 pH7．4，0．05mol·L～Tris—HCI条件下，采用荧光光谱法研究了乙二胺一Ⅳ，Ⅳr-二邻氨基 苯甲酸 (EDA)与牛血清 白蛋 白(BSA)的相互作用。结果表明，EDA与BSA的结合使蛋 白质的荧光被猝灭， 条件稳定常数为lgK=5．81-I-0．04，结合位点数为 1，并依据 Foerster能量转移理论确定EDA与BSA色氨 酸残基的最近距离 r为 2．14nm。 关键词 乙二胺一N，Ⅳ一二邻氨基苯甲酸；荧光光谱；牛血清 白蛋 白 中图分类号：0657．32 文献标识码 ：A 文章编号：1004—8138(2010)02—0505—03 1 引言 血清白蛋白是血浆中最为丰富的蛋 白质，它能与许多内源及外源性化合物结合，起到存储与 转运的作用Ⅲ，对生命活动有着十分重要的意义 。 在生理条件-VK~--胺一Ⅳ，^，一二邻氨基苯 甲酸 (EDA)(见图1)可与金属离子配位形成稳定的 配合物。由于苯甲酸基团参与配位而对 丌一丌跃迁的微扰，EDA与金属离子结合表现出明显的光 谱变化，具有研究生命金属的探针特性。据此，本文研究了EDA与血清白蛋白的结合性质 。 八 NH HN OH HO 图 1 EDA 的分子结构 2 实验部分 2．1 试剂与仪器 牛血清 白蛋白(生化试剂，中国科学院生物化学研究所)；三羟甲基氨基 甲烷等均为分析纯； EDA按照文献E2]合成。 HP8453UV—Vis吸收光谱仪(美国惠普公司)lCaryEclipse型荧光分光光度计 (美国瓦里安公 司)。 ① 联系人 ，电话 ：(0351)7016358；E—mail：yangbs@SXU．edu．cn 作者简介 ：冯姣 (1976一)，女，山西省长治市人 ．硕士研究生．主要从事生物无机化学研究工作。 收稿13期：2009—07—13；接受 日期：2009—08—25 光谱实验室 第 27卷 2．2 实验方法 配制pH7．4，0．05mol·L_。Tris—HC1缓冲液 ，用此缓冲液配制 EDA和 BSA溶液。BSA的浓 度通过测定 280nm处的吸光度确定(e一43000cm-1·mol-1·I)[引。 吸收光谱使用 lcm吸收池用HP8453UV—Vis吸收光谱仪测定 。荧光光谱的测定使用 lcm荧 光池，激发波长为 280nm，用CaryEclipse型荧光分光光度计记录 300--550nm 的发射光谱。 3 结果与讨论 3．1 EDA对 BSA荧光猝灭的机理 图2为用EDA溶液滴定ESA的荧光光谱。由图2可见 ，BSA在 344nm处出现最大荧光峰(曲 线n)，随着 EDA的滴加，该荧光峰逐渐被猝灭 ，同时在 403nm处出现 EDA的发射峰，且在 385nm 处存在一个等发射点(曲线6一z)。相同实验条件下 BSA不存在时EDA的荧光发射光谱如图2曲 线r可见激发波长为 280nm时EDA在403nm处的荧光强度远小于BSA存在时的荧光强度，BSA 使 EDA的荧光强度增强 6倍 ，表明二者间存在着相互作用 ，发生了能量转移 。 按照 Stern—Volmer方程E43： Fo／F=1+Kqr