胶质细胞谷氨酸转运体-1反义寡核苷酸对脑缺血预处理神经保护效应抑制作用.pdfVIP

生理学报 Acta Physiologica Sinica, August 25, 2008, 60 (4): 497-503 497 研究论文 胶质细胞谷氨酸转运体 -1 反义寡核苷酸对脑缺血预处理神经 保护效应的抑制作用 * 耿进霞，蔡劲松，张敏，李淑琴，孙晓彩，羡晓辉，胡玉燕，李文斌 ，李清君 河北医科大学病理生理学教研室，石家庄 050017 摘 要：本研究应用胶质细胞谷氨酸转运体-1 (glial glutamate transporter-1, GLT-1) 的反义寡核苷酸(antisense oligo- deoxynucleotides, AS-ODNs)抑制Wistar 大鼠GLT-1 蛋白的表达，观察其对脑缺血预处理(cerebral ischemic preconditioning, CIP) 增强脑缺血耐受作用的影响，探讨GLT-1 在CIP 诱导的脑缺血耐受中的作用。将凝闭双侧椎动脉的Wistar 大鼠随机分为7 组：(1) Sham 组：只暴露双侧颈总动脉，不阻断血流；(2) CIP 组：夹闭双侧颈总动脉3 min ；(3) 脑缺血打击组：夹闭 双侧颈总动脉8 min ；(4) CIP + 脑缺血打击组：夹闭双侧颈总动脉3 min 作为CIP ，再灌注2 d 后，夹闭双侧颈总动脉8 min ；(5) 双蒸水组：于分离暴露双侧颈总动脉(但不夹闭)前12 h、后12 h 及后36 h 右侧脑室注射双蒸水，每次5 μL ，其 它同sham 组；(6) AS-ODNs 组：于分离暴露双侧颈总动脉(但不夹闭)前12 h、后12 h 及后36 h 右侧脑室注射GLT-1 AS- ODNs 溶液，每次5 μL ，其它同sham 组，再根据AS-ODNs 的剂量进一步分为9 nmol 和18 nmol 2 个亚组；(7) AS-ODNs + CIP + 脑缺血打击组：于CIP 前12 h、后12 h 及后36 h 右侧脑室注射GLT-1 AS-ODNs 溶液，每次5 μL ，其它同CIP + 脑缺血打击组，根据AS-ODNs 的剂量进一步分为9 nmol 和18 nmol 2 个亚组。Western blot 分析法观察GLT-1 蛋白的表 达，硫堇染色观察海马CA1 区锥体神经元迟发性死亡(delayed neuronal death, DND)情况。Western blot 分析显示，侧脑室 注射GLT-1 AS-ODNs 可剂量依赖性地抑制大鼠海马CA1 区GLT-1 蛋白表达。硫堇染色显示，sham 组和CIP 组海马CA1 区未见明显的DND ；脑缺血打击组海马CA1 区有明显的DND ；预先给予CIP 可显著对抗脑缺血打击引起的DND ，表明 CIP 可以诱导海马CA1 区神经元产生缺血性耐受，对抗脑缺血打击引起的DND ；而在GLT-1 AS-ODNs + CIP + 脑缺血打 击组，侧脑室注射GLT-1 AS-ODNs 后，大鼠海马CA1 区出现了明显的DND ，表明GLT-1 AS-ODNs 通过抑制大鼠GLT-1 蛋白表达从而减弱 CIP 对抗脑缺血打击的神经保护作用。以上结果进一步证实了GLT-1 参与CIP 诱导的脑缺血耐受。 关键词：脑缺血预处理；脑缺血耐受；海马；胶质细胞谷氨酸转运体- 1 ；反义寡核苷酸；大鼠 中图分类号：R3 38 .2 Antisense oligodeoxynucleotides of glial glutamate transporter-1 inhibits the neuro-protection of cerebral ischemic preconditioning in rats GENG Jin-Xia, CAI Jin-Song, ZHANG Min, LI Shu-Qin, SUN Xiao-Cai, XIAN Xiao-Hui, HU Yu-Yan, LI Wen-Bin*, LI Qing-Jun Department of Pathophysiology, He