课件 基因工程的基本操作程序 浓缩版.pptVIP

一、目的基因的获取 基因文库的构建： 将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，并克隆，便构成了该生物的基因文库。 4.营养缺陷性筛选法： 载体分子携带营养成分（氨基酸，核苷酸）的生物合成基因，受体细胞基因突变，不能合成营养物质。两者构成营养缺陷。 在缺少营养物质的培养基上受体细胞不存活，存活的是导入成功的受体细胞。 * 基因工程的原理和技术 DNA的粗提取 1、从基因文库中获取目的基因： 基因组文库的构建： cDNA文库的建立： 基因文库 ： 基因组文库：包含该生物的所有基因。 cDNA文库：包含该生物的部分基因。 一般针对基因的编码区而建立。 2、体外直接合成目的基因 ① 利用PCR技术扩增目的基因 变性 退火 延伸 A PCR全称为_________________。 C 条件：____________________、 __________ 、 _______________________ 、____________。 B 原理：__________ D 结果：_____________________________________________________ 聚合酶链式反应 DNA复制 已知序列的目的基因 四种脱氧核苷酸三磷酸 一对引物 DNA聚合酶 使目的基因短时间内呈指数方式扩增 E 过程：________________________________________________ 高温变性、低温退火、中温延伸 由已知氨基酸序列推测可能的DNA序列 ②　利用DNA合成仪化学合成 合成较小的基因（不超过几十个碱基） 例：核酸分子杂交的探针，PCR扩增的引物等。 重组DNA分子的组成： 目的基因、标记基因、启动子、终止子 工具酶：限制性核酸内切酶、DNA连接酶 二、形成重组DNA分子 三、将重组DNA导入受体细胞 导入微生物细胞：用Ca2+处理受体细胞，将重组DNA与之混合； 导入植物细胞：土壤农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法等 导入动物细胞：对受精卵进行显微注射等 例：用携带外源基因的农杆菌Ti质粒转化植物细胞，使外源DNA与植物染色体DNA整合，通过培养形成愈伤组织，最后发育成转基因植物。 例：从转基因羊的羊奶中提取出治疗心脏病的药物tPA。同样方法可获得疫苗、生长激素等。 四、筛选含有目的基因的受体细胞 1.DNA分子杂交技术： 2.抗药性筛选法： 3.互补显色筛选法：原核 五、目的基因的表达 1、分子水平检测： 检测转基因生物的DNA是否插入目的基因 （即检测导入是否成功） 检测目的基因是否转录出了mRNA： 　　　　　　　　——分子杂交技术 检测目的基因是否翻译成蛋白质： 　 ——提取蛋白质、抗原-抗体杂交 2、个体水平检测：检测性状 * * *