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哺乳动物的精子获能及其鉴定 张士芳 -． (1．东北林业大学野生动物资源学院，黑龙江 哈尔滨 150040；2．黑龙江省科学院自然与生态研究所 150040) 摘 要：精子获能是精卵结合的前提，是哺乳动物受精过程中的关键环节。精子获能的发现促使体 外授精研究取得 了突破性进展，为人类研究受精机理奠定了基础 。本文从体 内、体外两方面论述 了 哺乳动物精子获能的培养方法，并且对精子获能的评价方法进行了综述。 关键词：精子获能；培养；评价 中图分类号：s8l4 文献标识码：B 文章编号：1005—2739(2010)02—0001—03 人及哺乳动物的精子在离开生殖道时，还不能 特别是输卵管内回收到的精子数量太少，测定获能 立即与卵子受精，它必须经历一系列生理、生化及形 精子化学成分的改变更加困难；并且，精子在体内总 态的变化才能获得受精能力，这种生理现象称之为 是与雌性生殖道分泌物接触，而雌性生殖道中存在 获~(capacitation)ll】。精子获能是精子受精前必须经 着影响获能的因子，对于复杂的体内环境人们又很 历的一个生理阶段 。自然情况下，精子获能是在雌陛 难控制，因而给研究精子获能带来极大的困难。为 生殖道 内进行，白宫颈开始，经历子宫和输卯管，最 此，体外获能的研究方法应运而生3J『。 后完成于输卵管壶腹部[21。研究表明，精子获能不仅 1．2 体外获能 可以在雌性动物生殖道内进行，也可以在体外适当 早期研究精子体外获能通常使用各种动物的体 的培养条件下进行。 液(如输卵管液、滤泡液和血清等)，而这些体液的成 1 精子获能的方法 分相对复杂，很难确定何种成分诱发或支持精子获 精子获能的方法分为体 内获能和体外获能两种。 能。自从Toyoda等最先报道了采用一种特定的化学 1．1 体内获能 培养基获得体外受精成功以来，分析体外精子获能 早期的获能研究，采用体 内获能的方法，即从交 已成为比较容易的事情5【_。以Tyrode、KRB、HamFlO、 配母畜的子宫内取出精子用于受精，以受精率为指 BSA、BWW、BO等培养液进行哺乳动物精子获能培 标，分析获能的部位、时程及其机制[31。进一步研究发 养均见报道。目前，常用的为BO液和改 良的Tyrdoe 现，获能过程没有种的特异性，即精子不仅在同种生 液(TALP)两大类。许多哺乳动物 ，如鼠、牛、猴、马 殖道内，而且可以在异种动物生殖道内或液体 内进 等，其精子体外获能的研究越来越多。近年来的研究 行获能。将牛精子放人家兔子宫和猪输卵管内培养 表明，体外获能发展起来的实验手段几乎可以达到 同样能使精子获能 。精子在成熟过程中，表面被覆 与体内获能相同的效果，这就使得体外获能的研究 了蛋 白质类和多胺类，这些物质的存在对获能具有 可以揭示体内获能的本质6[1。精子体外获能技术可以 抑制作用。在体内获能期间，精子在雌性生殖道内运 较好地控制实验条件，并可逐个分析获能的相关因 动时，子宫颈黏液、输卵管液和卵泡液，以及输卵管 子，极大地促进了精子获能的研究。 上皮细胞等，都有助于清除精子表面的抑制因子，促 精子体外获能总体包括两个步骤：一是精液的 进获能的发生。由于体内获能的研究，经常受到许多 处理，目的是减少或去除精浆内前列腺素、免疫活性 条件的限制，在机体生殖道内培养需时间，其环境也 细胞、细菌和碎片，减少精液的黏稠度 ，以促进精子 受卵巢激素影响，不稳定因素多，且雌性生殖道内， 获能；二是使用某些特定成分诱导精子获能和顶体 收稿 日期 ：2009—11-27 反应 。目前，诱导精子体外获能的方法主要有上浮 基金项 目：黑龙江省科学院青年创新基金。 法、沉淀加上游法和不连续密度梯度法。 作者简介：张士芳 (1981一)，女，硕士研究生，研究实习员。 经上浮法处理可获得活力较强的精子，但精子 黑龙江动物繁殖 第 18卷 第2期 2010年 回收