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业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2005,13 (5): 616~6 19
·研究论文·
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素
基因的真核表达及其核酸疫苗*
为成 严 琳 何启盖 肖少波 陈焕春**
(华中农业大学动物医学院动物病毒室，武汉430070)
邾
摘要：利用PCR 从自行分离鉴定的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌( , APP )血清7 型菌 基
因组DNA 中扩增 基因，构建了一个利用人类巨细胞病毒( , HCMV)启动子表达 基因的
真核表达质粒pCD ，体外转染PK-15 细胞，处理后的样品进行 SDS和Western blot 分析，证实了免疫原性蛋白
。用表达质粒 ，
apx 域A 在细胞中表达 pCD 作为核酸疫苗免疫BALB/c 小鼠酶联免疫吸附试验 ELISA 检测小鼠血清中
特异性抗猪胸膜肺炎放线杆菌的抗体，结果第2 次免疫后其抗体滴度都在 1颐128 以上。初步证实，用 作为核酸疫苗免
。
疫动物可以激活机体产生免疫应答反应 邾
关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌； 基因；表达；核酸疫苗；免疫应答
Eukaryotic Expression and DNA Immunization of Gene of
Porcine
BEI Wei-Cheng YAN Lin HE Qi-Gai XIAO Shao-Bo CHEN Huan-Chun**
邾
gene was amplified from genomic DNA and eukaryotic expression recombinant plasmid, pcD contain-
ing toxin gene of was constructed. The expression of foreign gene was promoted by imme-
diate-early enhancer/promoter of (HCMV). The plasmid was transfected into PK-15 cell . Expressed
protein was detected by SDSand Western blotting assay. The recombinant plasmid was also used as DNA vaccine to inj ect
BALB/c mice intramuscularly with 100 滋g/mouse. The immunization was boosted at the 2nd week after first inj ection. The antibody ti-
tle were measured by indirect ELISA and higher than 1 颐128. Collecting these results show
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