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鸡源多重耐药大肠杆菌可移动遗传元件分析 蒋月，盛鹏飞 (辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁锦州 121001) 摘要：为了解鸡源多重耐药大肠杆茵中可移动遗传元件的存在情况，采用KB法对57株鸡 源大肠杆菌进行了12种药物的敏感性试验，采用PCR方法检测了这些菌株的接合性质粒、转座 子和整合子共10种可移动遗传元件的存在情况。结果显示，57株鸡源大肠杆菌均为多重耐药大 I和intⅡ8种可移动遗传元件，每株多 肠杆菌，共检出traA、trbC、ISEcpl、IS26、tnpA、tnp513、int 重耐药大肠杆菌均可检出可移动遗传元件，且大肠杆菌耐药种类越多，可移动遗传元件的检出也 越多。同时携带相同可移动元件的多重耐药大肠杆菌也会表现出不同程度的多重耐药。 关键词：鸡；大肠杆菌；多重耐药；接合性质粒；转座子；整合子 随着我国养禽业的迅速发展及长期以来抗菌 控菌株ATCC25922购自中国兽医药品监察所。 药物的盲目大量使用，大肠杆菌耐药性逐渐增强， 1．2主要试剂和培养基 一些抗菌药物在治疗禽大肠杆菌病时已经达不到 PCR相关试剂购自宝生物工程(大连)有限公 理想的效果，致使禽大肠杆菌病在各地广为流行， 司。培养基购自杭州天和微生物试剂有限公司。DNA 并逐渐上升为危害养禽业最主要的疾病之一1，造 胶回收试剂盒购自北京天根生化科技有限公司。 成了巨大的经济损失。大肠杆菌对抗菌药物产生 1．3药敏试验 耐药性分为突变耐药和获得性耐药。获得性耐药 按照世界卫生组织推荐的KB法测定氨苄西林 大肠杆菌主要借助于可移动遗传元件(质粒、转座 子和整合子等)获得耐药基因2I，此过程又称耐药 基因的水平转移。近年来研究者对鸡源大肠杆 菌整合子检测的报道较为常见3，关于同为耐药 基因载体的其他可移动遗传元件的报道鲜见一；，因 抗菌药物的敏感性，每次试验前用标准菌株 5 此本文通过对鸡源多重耐药大肠杆菌的10种可 ATCC25922进行质控，药敏试验结果参照CLsI 移动遗传元件进行检测，探讨鸡源多重耐药大肠 判定标准进行。 杆菌与可移动遗传元件间的关系，不但有利于监 1．4可移动遗传元件的PCR检测 控鸡源大肠杆菌多重耐药情况与可移动遗传元件 提取大肠杆菌的总DNA为PCR模板，PCR反 Buffer 的流行趋势，同时也可为耐药基因的传播风险作 应体系：Taq酶0．25pL，10×PCR2斗L， dNTPMixfure 出评估，为防控禽大肠杆菌病提供理论依据。 2¨L，模板DNA1¨L，上下游引物 l材料与方法 各1斗L，灭菌蒸馏水加至25斗L。PcR运行参数： 94℃5 1．1 菌株 min；94℃30s；55～60℃30s：72℃45s， cc5 57株多重耐药大肠杆菌分离于辽西地区(锦州、 共30个循环；72 min。PcR产物用1％琼脂糖 盘锦、葫芦岛)的大型规模化养鸡场。大肠杆菌质 凝胶电泳分析。引物设计见表l。 2结果 2．1 药敏试验结果 收稿日期：2()13一”1—31 修回日期：2013—04—23 57株鸡源大肠杆菌对1