细胞骨架蛋白基因转录与小分子促小鼠胚胎干细胞定向分化神经元样细胞的相关性.pdfVIP

浙江大学学报(医学版) Vol No 第38卷第3期 38 3 2009年 JoURNALoFZHEJIANGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) 2009 http：∥www．journals．zju．edu．cn／med 细胞骨架蛋白基因转录与小分子促小鼠胚胎干细胞 定向分化神经元样细胞的相关性 许敏华1，吴佳莹1，欧丽丽2，朱丹雁1，俞永平2，楼宜嘉1 (浙江大学药学院1．药理毒理与生化药学研究所，2．药物研究所，浙江杭州310058) [摘 要] 目的：探索细胞骨架蛋白基因转录是否涉及全反式维甲酸(RA)促胚胎干(ES)细胞早 期定向分化神经元样细胞，以此构建快速评价药物对ES细胞定向分化神经元的促进或抑制作用。 方法：采用悬滴培养法模拟体内胚胎发育状态，形成拟胚体，进而贴壁向神经细胞分化。利用RT— PCR法评价神经元呈特征性表达的一类细胞骨架蛋白基因微管相关蛋白(尬以声2)、神经丝(Ⅳ∥沈) 和微管蛋白(卢一￡甜施z砌Ⅲ)转录水平，作为RA促ES细胞定向分化神经元指标，结合光镜和免疫荧 光法鉴定神经细胞的形成，由此构建快速评价体系。并在此基础上进一步评价合成化合物库内6个 小分子对细胞骨架蛋白基因转录的影响。结果：RA诱导ES细胞定向分化神经元过程，胞口声2和 Ⅳ∥扔转录水平均呈上调趋势，其中以胞以p2为甚，增加了1．27倍，并与同期细胞表型改变相一致， 但p一￡“6扰zi咒Ⅲ无明显变化。6个合成小分子均使施口声2转录受到抑制，但Ⅳ最励转录水平有不同程 度上调，l号和3号化合物尤甚，分别增加了1．4和1．2倍，该上调作用与同期细胞表型改变不尽一 致。结论：RA诱导ES细胞定向分化神经元早期，胞口声2和Ⅳ∥兢转录水平均呈上调趋势，其中 M￡口声2的表达与否与早期细胞表型改变相一致。 [关键词]干细胞／药物作用；胚胎／细胞学；微管相关蛋白质类／转录；神经元／细胞学；维甲酸／ 药理学；基因表达；中间丝蛋白质类；细胞，培养的；细胞分化 343 [中图分类号]Q [文献标识码]A [文章编号] of indifferentiationofneurons Transcriptioncytoskeletonproteingenes frommouse stemcellsinducedsmallmolecules embryonic by XU Li—li，ZHU Min—hua，WUJia—ying，OU Dan—yan，YU Yi—jia(，咒盯缸甜抛∥ Yong—ping，LOU 以咒d Bif)c，z已，孢if口Z P^以，_，，z以c．(，Zc，．Efy，T(J．zifoZog：y P^口r，挖nfP“￡ifs，Z^巧f以，zgU咒iuP7百i桫，．H口珂gz矗o“ 310058，C矗砌口) To the of in [Abstract]objective：investigatetranscriptioncytoskeletonproteingenes differentiationofneuronsfrommouse stem(ES)cellsinducedall—transretinoicacid embryonic by (RA)，andto the of amet