抗苄嘧磺隆慈姑ALS基因突变位点.pdfVIP

222 江苏农业学报(Jiangsu 吴明根，郑承志，李昕珈．抗苄嘧磺隆慈姑ALS糕凶突变位点¨]．江苏农业学报，2010，26(1)：222-224 抗苄嘧磺隆慈姑ALS基因突变位点 吴明根， 郑承志， 李昕珈 (延边大学农学院，吉林龙井133400) 关键词：慈姑；ALS基因；抗药性；突变 中图分类号：$432．2+3文献标识码：A 文章编号： 1000-4440(2010)01-0222-03 MutationLocusof withResistanceto in ALSGene SulfonylureaSagittaria T． sagittrifoliaL．var．10ngiloba WU Ming—gen，ZhengCheng-zhi，LiXin-jia (Agricultural 133400，China) College．‰nbmnUniversity，Longing Keywords：SagittariasagittrifoliaL．vaF．10ngilobaT．；月雎gene；herbicideresistance；mutation 东北地区属于施用稻田化学除草比较早的地区之一，使 G)TC(A／G)TC(A／G)AA。 用磺酰脲类除草剂已有20余年。研究结果证实，延边地区 稻田发生抗苄嘧磺隆的雨久花、慈姑、扁秆藤草，过去对su 及测序 除草剂极为敏感的慈姑、雨久花大发生，其靶标酶——新型 乙酰乳酸合成酶(A髓)对苄嘧磺隆、吡嘧磺隆的抗性系数增 dT为引物，以提取的总RNA为模板，经 剂盒说明书，以Oligo 到几十倍。。…。本试验通过测定感、抗性生态型慈姑ALS基 反转录合成cDNA。利用特异简并引物Apl、Ap2，以反转录 因部分片段的碱基序列，了解抗性ALS基因突变位点。 (2．0 1材料与方法 Ixl)、cDNA(1．0一)、Apl(10pmoL／L，1．0一)、Ap2(10 Mixture(2．5 1．1供试植物 pmoL／L，1．0斗1)、dNTP mmol／L，2．0一)、Ex呦 S，55 L．var．10ngilobaT．) (0．5出)、ddH20(12．5斗1)构成，反应程序为94℃30 抗药性慈姑(Sagittariasagittrifolia ℃30 材料采自多年连续使用苄嘧磺隆、吡嘧磺隆的延边地区稻 S，72℃lrain，循环30次。 田，敏感性材料采自野池塘。 回收、纯化PCR扩增的目的DNA片段，利用pMD．18T 1．2慈姑A上S基因特异兼并引物设计与合成 载体将目的DNA片断转化至JMl09感受态细胞中。经蓝白 斑筛选将其接种于含氨苄青霉素的LB培养液中并震荡培 通过美国生物技术信息中心(NCBI)登录的x51514(拟 养，按煮沸法提取质粒。将重组质粒DNA经酶切鉴定为阳 南芥)等lO种植物的ALS氨基酸序列信息分析，利用Primer 性的DNA克隆委托上海博亚生物公司测序。 primier5．0程序设汁了1对特异简并引物，其上游引物Apl： TC(A／C)ATGG