一种适用于甘蓝原生质体培养的简单通用的饲喂培养方法.pdfVIP

维普资讯 ·48· 农业科技情报 1991年 一 、 种适用于甘蓝原生质体培养的 简单通用的饲喂培养方法 雷秀兰 译 (西南农业大学图i馆) 对甘蓝 (Bra~sicaolraca)根、茎。叶、 培养细胞。其 中有油菜 (B．campestris)悬 子叶、下胚轴等外植体制备的原生质体，不少 浮培养细胞 (BCS)，悬浮培养时每7天继代 研究者已进行了成功 的培养，并获得 了完整 ～ 次，转代时取5ml悬浮培养物加入35m]新 的再生植株。在这些培养研究中，除少数几例 鲜培养液中，150r／min，25℃振荡培养， 是用琼脂糖包埋块培养，固体平板培养或固 培养基为LS附加3％蔗糖，200mg／I水解酪 液双相培养外，绝大多数研究都是采用液体 蛋 白 (CH )， lmg／LNAA ，5mg／LBA 浅层培养。虽然甘蓝原生质体培养不乏成功 和0．1nig／L2．4～D。此外，还试验了水稻、 之例，但不同品种 问仍存在着很大的差异，有 番茄、烟草悬浮培养细胞作饲喂层的作月j，但 些品种的原生质体虽能培养至愈伤组织，但 在本实验 中，只有油菜细胞对甘蓝原生质体 其再生能力很低甚至完全不能再生，而有些 培养具有明显的提高植板率的效果，而其它 品种的原生质体则很难分裂，这就限制 了对 植物的悬浮细胞作饲喂层的效果欠佳，虽然 甘蓝类植物原生质体进一步的研究和进行广 用番茄细胞作饲喂层时，能促进培养的原生 泛的遗传重组，此外，在迄今获得的甘蓝原 质体生长矛f细『胞团形成，但这些缅胞 团很快 生质体再生植株培养 中，起始时的原 质体 褐化并死亡；而用水稻和烟草细胞作饲喂层 密度都较高，一般必须在l0～l0个原生质 培养原生质体时，则很少形成细胞团。 体／毫升，才能有较高的植板率，而低密度 制备饲喂层前，先用新鲜培养液讥 细 培养的原生质体则难 以分裂，或 植 板 率 很 胞密度达到细胞沉积体 积 (取 10m!，]．00g 低，这样，就 限制 了对甘蓝原生质体进行微 速度离心1O分钟，测定PVC)占总 体积的 注射转移外源基因等显微操 研究的开展， 0。55。然后取悬浮培养物1．5m!，铺肤 在培 因为这些操作得到的原生质体的量通常是很 养皿 (直径1Ocm )中固体原生质体培 养 少 的。虽然 也 有 人 (SpangengJ1erg等， (Pelletier等，】983)上。再存上 面 铺 一片 1985)进行 了B．napus原生质 体 的微滴 培 醋酸 ／硝酸纤维素混合滤膜，膜的 孔 径 为 养，但这一方法从原生质体到再生植株所需 0。sum，黑色，具 网格。 的时问太长 (需150---200天 )。 饲喂皇制备好后 ，将待培养的原生厥休 美国康奈尔大学的T．W ．Waiters等 ：浮液 吸管滴加在滤膜上，原生质体窬度 最近设计了～种简便有效的饲嘤层 培养 系 调至5～10×l0 ／m!，每小滴的体 积 控 铂 统，将难 以进行培养的花椰菜 (B．ol,rac￡d‘ 在100u!或500u]。此外，为 了进甜低密 培 ssp．botrytis)和ssp．italica原生质 成 养，用显微操作器 分 离 出合】o～lOO个 原 功地培养出再生植株，且获得了较高的植板 生质体的悬液约5ul于滤膜上进行培养。 车。制备饲喂层是用继代后 9～ 12天的悬浮 25℃下暗培养1O～14天后，将膜连同原生质