丹皮酚对肝癌细胞HepG2凋亡及NF-κB通路的影响.pdfVIP

· 48 · 中国中医药科技2010年 1月第 17卷第 1期 Jan．2009Vo1．17No．1 丹皮酚对肝癌细胞 HepG2凋亡及 NF一，cB通路的影响* 钱翠娟 姚 军 王建文 张 欣 王宏刚 (浙江省台州市立医院 ·台州318000 台州学院医学院检验 系·台州318000) 摘 要 目的：研究丹皮酚对 TNF(I诱导的人肝癌细胞 HepC~凋亡及核转录因子 JcB(nuclearfactor—KB，NF — JcB)活化的影响。方法：培养rlepG~细胞分别用肿瘤坏死因子a(咖 a)刺激和丹皮酚+WNFct共同作用， 并设立未加药的空白对照组，用流式细胞技术测定细胞凋亡率；westemblot分析细胞核 中NF—xBp65及 其细胞浆中抑制 因子 lxl3a的表达；EMSA方法检测 NF一，cB表达及活化情况。结果：丹皮酚 (125— 500tanol／L)能抑制TNFt~诱导的NF一 活化及 NF一~v6_s的核转移，减少胞浆 中IIc＆ 的降解，且增强 TNFct诱导的细胞凋亡。结论：下调NF—KB是丹皮酚增强TNFff诱导的HepC~细胞凋亡作用的部分机制。 主题词 肝肿瘤 ／中医药疗法 丹皮酚／治疗应用 细胞凋亡 化疗药物的耐药及其毒副作用一直是肝癌治疗的两大 1．5 NF—gBp65、Ixl3a蛋白表达的测定 电泳迁移率改变 难题 ，因此在植物中寻找有效且副作用小的抗肿瘤药物已成 分析法 (巨MsA)检测。 为国内外重要的研究课题。丹皮酚 (paeond)是中药牡丹皮 1．6 NF—rJ3DNA活性的测定 参照GelShiftAssaySystem试 (CortexMoutan )中提取的活性成分。已有研究证实， 剂盒方法进行。 丹皮酚可诱导某些肿瘤细胞凋亡，如大肠癌、肝癌 以及 胃癌 1．7 统计学分析 常规进行方差齐性检验、正态性检验。 等-lJ，但是，其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制及其信号转导 计量数据以均数 ±标准差 ( ±)表示。单变量两组资料之 途径 尚不清楚，丹皮酚与肝癌细胞 NF—xB活性的关系以及 间的比较采用 ￡检验，多组资料之间的比较采用单因素方差 对肿瘤细胞凋亡的影响尚未见报道。为此，本实验在此方面 分析。采用 SPSS16．0统计处理软件分析。 进行研究，探讨肝癌治疗的新途径。 2 结果 1 材料与方法 2．1 丹皮酚对 TNFct诱导肝癌 HepC~细胞凋亡的影响 见 1．1 药品和试剂 丹皮酚：上海第一制药厂(10mg：2ml，批 表 1。 号：990402)。肝癌 HepG~细胞株 ：本实验室保存。RPMI 表 1 各组 HepG2Ntlfl~h2率的比较 (±s，％) 1640：Gibco公司。MTr粉、PI：Sigma公司。抗 NF—KB抗体 (兔抗人多克隆抗体)：本室制备。蛋白质分子量marker、M— PerMammalina总蛋白抽提试剂盒 ：美国Pierce公司。细胞浆 及细胞核蛋白抽提试剂盒：美国ActiveMotif公司 。胎牛血 清：杭州四季青公司。 与空白组比较 *Jp0．05，**P0．01；与 或丹皮酚组比 1．2 细胞培养 肝癌 I-ler~ 细胞株采用 DMEM培养液，其 较 ／xpO．05 中加入 100U／ml青霉素、50U／ml庆大霉素及 10％胎牛血 2．2 丹皮酚对 TNFQ诱导HepG~细胞核 NF—xBp65表达及 清。细胞于培养液中在 37~C、饱和湿度、5％c02培养箱中常 胞浆 IK踟 表达的影响 丹皮酚在 1251xmol／L浓度时就能明 规培养。