人EGFL7基因真核表达载体构建及鉴定.pdfVIP

· 32 · 医学临床研究 2010年 1月 第 27卷 第 1期 JClinRes，JAN． lo !， 论著 人 EGFL7基因真核表达载体构建及鉴定 黄纯海 李学军。 周异 曾 罗勇 田志 袁贤瑞。… (1．吉首大学第一附属医院神经外科， 湖南 吉首 416000； 2．中南大学湘雅 医院神经外科，湖南 长沙 410008) [摘要]【目的】构建人类表皮生长因子域 7(EGFL7)基 因的真核表达栽体 。【方法】通过聚合酶链式反应(PCR)方法 扩增EGFL7目的片段 ，利用基 因重组技术构建pEGFPC1一EGFI7真核表达载体 ，并进行酶切和测序鉴定。鉴定正确 的克隆瞬时转染293T细胞，通过 Westernblot方法检测 目的蛋 白的表达。 【结果】通过酶切和测序鉴定 ，pEGFPC1一 EGFL7真核表达载体序列正确，编码框正确。转染后的 293T细胞经Westernblot检测，能够表达 目的蛋 白。 【结论】本 方法成功构建 了EGFL7真核过表达载体，为进一步研 究其功能奠定 了基础 。 [关键词] 基因表达 ； 遗传载体 Construction and Identification of Eukaryotic Expression Vectors ofHuman EGFL7 Gene HUANGChunhai， LIXue—j．n， ZHOU —zeng，etal(DepartmentofNeurosurgery，theFirstAJfiliated Hospital，JishouUniversity，Hunan416000，China ) [Abstract]【()bjective】Toconstructeukaryotieexpressionvectorsofhumanepidermalgrowthfactor—likedomain7 (EGFL7)geneandtodetecttheirexpressionin293Tcellline．[Methods]EGFL7wasamplifiedbypolymerasechain reaction(PCR)．TheeukaryoticexpressionvectorsofpEG-FP—C1一EGFL7wasconstructedbygenerecombinationtech— niqueandtherecombinantplasmidswereverifiedbyrestrictionenzymeanalysisandsequencing．Thenpositiveclones weretransfectedinto293Tcellline．ExpressionoftargetproteinswasanalyzedbyWesternblot． 【Results]These— quencesandopenreadframesofthevectorwerecompletelyconcordantwithexperimentdesign．Thetargetproteins couldbeobservedintransfected293TcellsbyWesternblot．[Conclusion]EukaryoticexpressionvectorofEGFI7is successfullyconstructed．Itprovidesanexperimentalbaseforfurtherresearchwork． -[Keywords~ geneexpression； geneticvectors [中图分类号] R394．2 [文献标识码] A [文章编号] 1671—7171(2010)01—0032—04 (P、P。时点)试验组患儿的疼痛评分明显低于对 照 zation~J]．AnesthAnalg，1993，77(2)：362379． 组，说明双氯酚酸能有效地抑制了致痛物质的合成 ， [2] waIlPD．Thepreventionofpostoperativepain[J]．Pain，