儿宝方对厌食症患儿舌苔上皮细胞Bax、Bcl-2、Fas表达的影响.pdfVIP

· l2 · 中国中医药科技 2010年 1月第 17卷第 1期 Jan．2010Vo1．17No．1 儿宝方对厌食症患儿舌苔上皮细胞 Bax、Bcl一2、Fas表达的影响* 万力生 罗宏英 张丽辉 周少明 岳丽杰 李德发 祖 莹 (深圳市儿童医院 ·深圳 518026) 摘 要 目的：研究厌食症患儿经儿宝方治疗前后凋亡相关基因Box、Bcl一2和Fas在舌苔上皮细胞内的 表达情况。方法：采用免疫组织化学技术进行凋亡蛋白的定位和定量分析。结果：厌食症患儿厚腻苔组 治疗前舌苔细胞中Bcl一2基因表达增加，Bax和Fas基因表达下降，而花剥苔组治疗前舌苔细胞中Bcl一2 基因表达下降，Bax和Fas基因表达增加，与正常薄苔组比较均有显著性差异(P0．01)，经过 中药儿宝方 治疗后，Bcl一2、Bax和Fas在舌苔上皮细胞中的表达厚腻苔组、花剥苔组与正常组比较无显著性差异 (P 0．05)。厌食症惠儿治疗前后舌苔细胞中凋亡相关基 因的阳性单位 (PU值)与正常组比较均无显著性 差异 (P0．05)。结论：厌食症的发生可能与舌苔上皮细胞相关基因的异常凋亡呈相关性，而中药儿宝方 运脾治疗可 以调节厌食症患儿舌苔细胞的凋亡平衡 。 主题词 厌食，中医药疗法 @儿宝方，治疗应用 基因表达 儿童 人类 近年来 ，有关舌苔变化机理的研究已从亚细胞水平发展 涤、涂片后 一7O℃密闭保存备用。 到基因水平，从细胞凋亡的角度对舌苔的变化机理研究结果 2．3 Bax、Bcl一2及 Fas蛋 白表达的测定 免疫组化 sP法。 表明，舌苔上皮细胞在增殖、分化的同时，有一部分细胞发生 所有标本涂片以冷丙酮固定 15分钟，ddH2O充分洗涤；过氧 了凋亡。中医学认为，舌苔异常(厚腻苔或花剥苔)是厌食症 化物酶阻断剂作用 10分钟，PBS洗涤 3min×3次 ；非免疫动 患儿食欲低下、不愿进食的病理特征之一。本课题组在阐明 物血清作用 1O分钟；涂片分3组，分别加入 3种第一抗体 ， 了厌食症患儿舌苔变化与外周血微量元素含量关系…的基 孵育6o分钟，PBS洗涤3min×3次；生物索标记二抗作用 1O 础上，从细胞凋亡相关基因的角度揭示了厌食症患儿舌苔变 分钟，PBS洗涤3min×3次 ；链霉菌抗生物素一过氧化物酶溶 化与细胞凋亡的相关性及中药儿宝方的干预作用。现将结 液作用 10分钟，PBS洗涤3min×3次；新鲜 DAB显色；苏木 果报道如下。 素复染，水洗返蓝。阳性反应信号为棕黄色，阴性对照用 1 临床资料 PBS代替第一抗体，反应为无色。以上反应均在室温下进 1．1 一般资料 厌食症患儿60例全部为2008—02～2008— 行。 1O来 自深圳市儿童医院门诊，年龄为 1～14岁，其中厚腻苔 2．4 图像半定量分析和统计处理 采用空军总医院生物医 组30例，花剥苔组30例。男3l例，女29例；平均 3．96岁， 学工程研究所研制的CMIAS真彩色病理图像分析系统 ，每 病程 1月 ～8年。 张涂片在高倍镜 (40×10)下随机选取 10个视野，免疫组化 1．2 中医诊断标准 参照 《中药新药临床研究指导原则 ·第 测定每张涂片的阳性细胞百分数和阳性单位 (PU)；所有数 3辑 ·中药新药治疗dxJL厌食症的临床研究指导原则》。 据以均数±标准差 ( ±)表示，统计学处理采用 SPSS10．0 1．3 主要试剂 鼠抗人Bcl一2、Bax单克隆抗体、兔抗人Fas 软件。结果中阳性细胞百分数的比较先经过平方根反正弦 — L多克隆抗体、免疫组化 UltraSensitiveTMS—P超敏试剂 变换