天麻素对戊四氮致痫大鼠的脑保护作用.pdfVIP

· 46 · 中国中医药科技2010年 1月第 l7卷第 1期 Jan．2009Vo1．17No．1 天麻素对戊 四氮致痫大鼠的脑保护作用 穆朝娟 张 涛△ 党 雁 (山东省精神卫生中心 ·济南250014 山东省千佛山医院 ·济南250014) 摘 要 目的：探讨天麻素对戊四氮致痫大 鼠的神经元、星形胶质细胞和血管 内皮的保护作用。方法： Wistar大鼠，随机分成 5组，对照组，戊四氮(PIZ)致痫组 ，丙戊酸钠(VPA)干预组，小剂量天麻素(cs)干预 组和大剂量天麻素 (Gb)干预组。每组分4个时间点：12小时、48小时、5天和 7天。HE染色观察海马区 组织学改变，免疫组化检测海马区的GFAP和cD 变化。结果：除对照组无痫样发作外，其余各组全部 出 现Racine分级Ⅳ一V级痫样的发作。HE 染色示FIZ组海马区神经元及血管内皮细胞变性、坏死显著； VIA组和天麻素组损害较轻。免疫组化结果显示PTz纽 GFAP染色在海马区和血管有高表达 ，5天达高 峰；cD表达水平在48小时以内较低 ，5天达高峰；与VIA组、cs组和Gb组比较差异有统计学意义(P 0．05)。结论：天麻素能减轻戊四氮致痫大鼠海马区神经元、星形胶质细胞和血管内皮细胞的损伤，从多 个层面保护脑组织 ，减轻 由癫痫导致 的损伤。 主题词 癫痫／中医药疗法 天麻素／治疗应用 大鼠 癫痫(EpilepsyEp)是一种以脑神经元发作性异常放电导 有限公司)和丙戊酸钠20mgk·g (杭州赛诺菲圣德拉堡民生 致临床反复痫性发作为特征的综合症。以往对神经保护的 制药有限公司)腹腔注射，对照组予生理盐水腹腔注射。 研究主要集中在神经元本身，认为只要阻断导致神经元坏死 1．3 观察指标及测定 和凋亡机制中的一个或几个环节便可减轻神经元的进一步 1．3．1 免疫组织化学染色 损伤。近年的研究发现：任何导致神经元损伤的原因如：缺 每只动物均于惊厥发作后给予腹腔 内注射戊巴比妥钠 血缺氧、癫痫、感染、外伤、肿瘤、中毒等都可能同时损伤胶质 麻醉，取脑固定，然后制成石蜡切片。切片置于 3％过氧化 细胞和血管内皮细胞，后者的病理变化会加剧神经元的进一 氢中室温孵育以阻断内源性过氧化物酶活性，然后经非免疫 步损伤。因而提出神经血管单元(nearovaseularunit)的概念， 动物血清，室温下孵育 1O分钟。依次加入 1：100兔GFAP抗 认为在神经保护治疗的同时必须兼顾对胶质细胞和血管内 体 (一抗)或 1：50兔抗 鼠c 抗体 (博士德生物工程有限公 皮的保护。研究显示天麻素 (Go．$trt~r,／)可对神经元、胶质细 司)4~C冰箱过夜，生物素标记的山羊抗兔 即用型抗体 胞和血管内皮细胞多个环节起作用。本文 旨在探讨天麻索 (福州迈新生物技术开发公司)室温下孵育3o分钟，链霉菌 对戊四氮癫痫模型大鼠惊厥发作后海马区神经元的变化、星 抗生物素一过氧化物酶溶液室温下孵 育 1O分钟。DAB显 形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(al助r山aryacidprotein， 色。常规脱水，透明封片。用已知的阳性切片作为阳性对 GFAP)及血管内皮细胞c 表达的影响，以期对癫痫的防治 照，以PBS取代一抗所得的切片作为阴性对照。 提供有价值的资料。 1．3．2 结果判定 1 材料与方法 1．3．2．1 HE 染色 OLYMPUS光学显微镜观察海马区组织 1．1 实验动物及分组 健康成年雄性 SPF级 Wistar大 鼠 学改变。 102只，由山东大学动物实验中心提供，月龄 3 4月，体重 1．3．2．2 GFAP 应用 Image—proplus4．0图像分析软件对 200—250g，笼养，自由进水、进食，室温保持在 18～25℃。随 切片进行分析，测GFAP阳性反应