柠条锦鸡儿肉桂酸-4-羟基化酶基因克隆及表达分析.pdfVIP

摘 要 苯丙烷途径是植物特有的次生代谢途径, 也是植物三大次生代谢途径之一。在维 管植物中，苯丙烷的终产物主要用于合成木质部的木质素单体和在色素合成、药物成 分及微生物与植物互作方面都发挥重要作用的黄酮类物质。肉桂酸-4-羟基化酶催化 苯丙烷途径中的第二步反应，将反式肉桂酸转变为ρ-羟基肉桂酸(即对羟基香豆酸) ， 在整个途径中起着十分重要的作用。本研究首次从柠条锦鸡儿中克隆到肉桂酸-4-羟 基化酶基因并对其进行了表达分析，具体结果如下： 1 运用RT-PCR 及RACE 技术从柠条锦鸡儿中克隆到一条肉桂酸-4-羟基化酶基因 的全长cDNA 序列 (命名为 CkC4H) ，GenBank 登录号为HQ829860 。生物信息学分 析发现 CkC4H 长 1685bp，具有完整的 ORF，预测编码 505 个氨基酸，分子量为 57850.1D 。结构域分析表明CkC4H 蛋白具有信号肽、跨膜结构域和典型的细胞色素 P450 结构域特征。CkC4H 对应的gDNA 序列全长4718bp ，有3 个外显子和2 个内含 子。 2 应用实时荧光定量RT-PCR 方法检测柠条锦鸡儿不同组织部位 CkC4H 的表达 量发现，CkC4H 基因在不同组织部位表达情况有所不同，其中根中表达量最高，茎 中次之，叶中表达量最低。受到创伤后，茎与叶中CkC4H 基因均可被诱导表达，最 高表达量出现在4 小时左右，且叶中的诱导水平高于茎中。 3 构建了过表达双元载体35S::CkC4H 并转化野生型拟南芥，在T3 代转基因植物 中共鉴定出8 个CkC4H 过表达纯合株系。采用实时荧光定量qRT-PCR 方法对过表达 株系的CkC4H 表达量进行了检测，结果表明CkC4H 基因的表达量在8 个株系中均有 不同程度的增加。 关键词：柠条锦鸡儿；拟南芥；过表达；CkC4H；苯丙烷途径；创伤 Cloning and Expression Analysis of Cinnamate-4-hydroxylase Gene from Caragana korshinskii Kom. Abstract The phenylpropanoid pathway is the specific secondary metabolism pathway in plant s, and belongs to one of the three plant’s secondary metabolism pathways. In vascular plants, the phenylpropanoid’s final product is used to synthesize the lignin monomer, and the flavonoid which plays an important role in pigment formation, medicinal ingredients, and the interaction between microbes and plants. Cinnamate 4-hydroxylase, which has an important function and catalyzes the second step in phenylpropanoid pathway, to be specific, it converts the trans-cinnamic acid into ρ-hydroxyl cinnamic acid (ρ-coumaric acid). In this research, the cinnamate 4-hydroxylase encoding gene was cloned for the first time from Caragana Korshinskii Kom and its primary functions were analyzed. The concrete conclusions are as following: