山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞信号转导相关分子水平的影响.pdfVIP

动物医学进展 。2O10，31(1)：36—4l ProgressinVeterinaryMedicine 山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞信号转导相关分子水平的影响 帅学宏 一，苏子杰 ，胡庭俊 ，曾 芸 ，韦英益 ，李跃华 (1．广西大学动物科学技术学院．广西南宁 530005；2．甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070) 摘 要：为探讨 山豆根多糖(SSP)对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞信号分子的影响，采用终浓度为 5O、 100、200、400 g／mL的山豆根多糖分 4、8、l2、24h4个时间段刺激培养鸡脾脏淋巴细胞，测定培养上清或 细胞 内环磷酸腺苷 (cAMP)、环磷酸鸟苷 (cGMP)、6一酮一前列腺素 F (6一keto—PGF-)、血栓素B2(TXB2)和一 氧化氮(NO)信号转导分子水平。结果表 明，山豆根多糖在终浓度为 100p．g／mL时与鸡脾脏淋巴细胞共 同 培养 8h后能显著升 高cAMP(Pd0．01)、6一keto—PGFl(Pd0．05)、TXB2(P0．01)水平，4种浓度的山 豆根多糖对NO分子水平随时间的变化有不同程度 的升高 (P0．05)，影响 cAMP／cGMP和 6一keto— PGF ／TXB。信号体 系。提示山豆根 多糖可通过影响免疫细胞 内的信号转导而影响机体的免疫功能。 关键词：山豆根 多糖 ；淋 巴细胞 ；信号转导 中圈分类号 ：Q592；Q53 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2010)01—0036—06 山豆根又名广豆根 ，小黄连 ，为豆科植物柔枝槐 PGF。和 TXB试剂盒购 自北京北方生物技术研究 (Sophorasubprostrata)的根，主产广 西，性寒，味 所；cAMP和 cGMP试剂盒购 自上海中医药大学核 苦，具有清火解毒，消肿止痛等功效L1]。山豆根多糖 医学实验室；无水对氨基苯磺酸为天津市福晨化学 (Sophorasubprostratapolysaccharide，SSP)是从其 试剂厂产品；二盐酸一1一萘乙二胺为国药集 团化学试 根部提取出来的一种天然多糖。它不仅可刺激淋巴 剂有限公司产品。 细胞增殖 ，促进 PWM诱导的抗体产生 ，刺激小 鼠淋 1．1．3 主要仪器 UV一1800紫外可见光分光光度 巴细胞分泌 IgGL2]，且具有抗氧化作用[3]。山豆根 计 (北 京瑞 利 分析 仪 器公 司)；梅特 勒一托 利 多 多糖还可以增加小 鼠脾脏 T淋巴细胞分泌NO和 AB104-L电子天平 (瑞士)；GC一2016型 放射免疫 IL一2，升高 Ca 浓度和增强 PKC活性[4]。研究表 计数器(科大创新股份有限公司中佳分公司)；冷冻 明，淋巴细胞表面存在多糖受体 ，多糖通过与受体结 离心机 (德 国Sigma公司)。 合 ，可启动淋巴细胞信息传递 ，进而影响淋巴细胞基 1．2 方法 因表达和活化增殖 5【J。本试验观察 了山豆根多糖对 1．2．1 样品处理及分组 将供试鸡经颈静脉放血 鸡脾脏淋 巴细胞产生环磷酸腺苷 (cAMP)、环磷酸 处死 ，无菌条件下采其脾脏 ，用 D-Hank’S洗去表面 鸟苷(cGMP)、6-酮一前列腺素 F。。(6-keto—PGF．。)、血 血液 。在培养皿 中加入适量 的D-Hank’S液，将脾 栓素B (TXB。)和一氧化氮 (NO)信号分子 的影响， 脏在其中剪成小块 ，轻轻磨碎后用 200目滤网过滤 ， 为进一步揭示山豆根多糖的作用机制提供依据 。 收集滤液，缓慢加在等体积的鸡淋 巴细胞分离液中， 1 材料与方法 2000r／min离心 10min，收集 中间层的淋巴细胞 ， 1．1 材料 用 D-Hank’S液洗涤两次后加入无酚红的 RPMI- 1．1．1 实验动物 良风花鸡 ，雄性，健康 ，60日龄 。 1640完全培养液 ，调整浓度为 4×10eells／mL。取 1．1．2 药物与试剂 山豆根多糖 ，为灰 白色粉末 、 4个 24孔培养板 ，分为 4个时间段 即4、8、12、24h， 易溶于水 ，不溶于乙醇 、丙酮 、乙醚等有机溶剂 ，由广