荧光原位杂交技术检测原发性胃肠道淋巴瘤染色体及基因变异方法的建立.pdfVIP

实用医学杂志 2010年第 26卷第 1期 9 · 基 础 研 究 · 荧光原位杂交技术检测原发性 胃肠道淋 巴瘤 染色体及基因变异方法的建立 冯莉娟 张国平 曹鹏飞 傅春燕 赖惠英 摘要 目的：建立检测原发性 胃肠道淋 巴瘤 (PGIL)染色体及基 因变异的荧光原位杂交技术(FISH)标准方法 方法 ：采用增强组织通透性、适当消化、控制变性时间、采用慢洗等方法摸索该种标本 FISH检测方法。结果 ：本研 究建立的FISH方法获得 了PGIL瘤细胞 的P53基 因探针 (绿 色荧光信号)、D13S25基 因探针 (红 色荧光信号)、IGH 基因探针 (红 ／绿或黄 色荧光信号)的清晰图像。结论：通过对诸多因素的系统分析与比较 ．建立 了一套检测包括 PGIL在 内的结外淋巴瘤的染色体及基因变异的FISH检测技术 为临床研究打下了基础 关键词 淋巴瘤； 胃肠肿瘤： 染色体 ； 基因变异； 原位杂交，荧光 EstablishmentofFISH techniquetodetectchromosomeandgenevariationofgastrointestinallymphoma FENG Li~uan ，ZHANGGuo-ping，CA0Peng-fei，FUChun—yah．LAIHui—ying．{DepartmentofGastroenterology，Xiangya Hospital，centralSouthUniversit)，Changsha410078，China A【bstract】 Objective Toestabilishthestandardmethodoffluorescenceinsituhybridization (FISH)todetect chromosomeandgenevariationsinprimarygastrointestinallymphoma (PGIL)．Methods FISHdetectionmethodfor gastrointestinal lymphoma tissues was explored by enhancing tissue permeability，appropriate digestion，controling degenerationtimeandwashingslowly．Results ClearpicturesofPGILtumorcells：P53geneprobe (greenfluorescent signa1)，D13S25geneprobe(redfluorescentsigna1)，andIGHgeneprobe(red／greenoryellowfluorescencesigna1)were obtained． Conclusion FISH techniquehasbeenestablishedtodetectchromosomesandgenevariationsofextranodal lymphomaincludingPGIL． K【eywords】 Lymphoma； Gastrointestinalneoplasms； Chromosome； Genevariation；Insituhybridization， fituoreseenee 荧光原位杂交技术 fluorescenceinsituhybridi— 例患者共重复实验 10次。 zation，FISH)是一种新型的分子细胞遗传学技术 ，其 1．2 方法 原理是采用荧光标记的DNA探针 ．利用探针与被检样 1．2．1 主要试剂 20mg／mL蛋 白酶K工作液(sigma 本中DNA的碱基对 的互补性．在探针与样本的DNA 公司)；乙醇溶液(70％乙醇、85％乙醇)；2XSSC；甲酰 杂交后，通