触减PCR在扩增抗体重链和轻链可变区中的应用.pdfVIP

山西医科大学学报 (JShanxiMedUniv)2010年 1月 · 91 · · 方法与技术 · 触减 PCR在扩增抗体重链和轻链可变区中的应用 秦 琴 ， 刘建荣， 王毅民， 董丽娜 ， 高嵩丹 (山西省人民医院中心实验室，太原 030012； 通讯作者 E-mail：qinqin098@yahoo．(~on1．en) 摘要： 目的 探讨扩增人免疫球蛋白重链和轻链可变区基因的方法。 方法 提取经免疫的具有乙肝表面抗体的人外周 血淋巴细胞总RNA，反转录合成cDNA，采用普通PCR和触减PCR两种方法扩增抗体重链和轻链可变区基因。 结果 利用 触减PCR方法，扩增出抗体重链和轻链的可变区基因，基因片段分别约为 340bp和 325bp，而普通 PCR没有得到预期的结 果。 结论 触减PCR比普通PCR更容易扩增出抗体可变区基因片段。 关键词： 触减PCR； 噬菌体展示技术； 抗体库 中图分类号： R一33 文献标志码： A 文章编号： 1007—6611(2010)O1—0091～03 Applicationoftouch·downPCR foramplifyingheavy-chainandlight-chainvariableregion genesofimmunogiobulin QINQin ，LIUJian—rong，WANGYi—min，DONGLi—na，GAOSong—dan(CentralExperimentLaboratory，ShanxiProvincialPeople’S Hospital，Taiyuan030012，China； Cowespot~ingauthor，E—mail：qinqin098@yahoo．corn．cn) Abstract： 0bjective Foexploreabettermethodtoamplifyheavy—chainandlight—chainvariableregiongenes(VHandVL)ofimmu— noglobulin． Methods TotalRNAwasextractedfrom humanperipheralbloodlymphocytes(PBI)fromhealthyvolunteerwithantibody againstHBsAg，andconvenedintocDNAbyreversetranseriptase．Thevariableregiongenes(VHandVL)ofimmunoglobulinweream— plifiedbyordinaryPCRandtouch—downPCR(TDPCR)． Results VHandVLgenesweresuccessfullyamplifiedbyTD PCR，and thelengthswere340bpand325bprespectively．However，VH andVLgeneswerenotamplifiedbyordinaryPCR． Conclusion TD PCR isabettermethodtoamplifytheVH andVIgenethanordinaryPCR． Keywords： touch—downPCR； phagedisplaytechnology； antibodylibrary 噬菌体抗体库u 是将编码抗体的可变区基因 SAGTCDGS一3；VH3端弓I物 PvH2：5一TGAGGA 插入编码噬菌体外壳蛋 白的基因中，抗体就与外壳 GACGGTGACCRK KGTBCC一3；VL5端 引物 蛋白融合表达在噬菌体表面，形成噬菌体抗体库，从 PLH1：5 一GAM ArYSWG M ACB CAG TCT CC一 而被特异的抗原筛选出来。 3；VL3端引物 PLm：5 一ACG GATYTCCAS 抗体可变区基因片段的获得是噬菌体抗体库建 YYKKGTCCC一3；反转录引物 ：寡聚胸腺嘧啶Oli— 立的关键。目前，多数实验都是根据抗体可变区基 go(dT) 。引物 由TakaRa公司合成。 因相对保守序列设计并合成简并引物，利用PCR方