转染Podoplanin对口腔白斑细胞增殖和细胞周期的影响.pdfVIP

· 6 · 华 口腔医学杂志2010年 1月第45卷第 1期 ChinJStomatol，January2010。Vo1．45．Nn1 ． 口腔 黏 膜 病 学 研 究 ． 转染 Podoplanin对 口腔 白斑细胞增殖 和细胞周期的影响 孙强 严明 周晓健 李新明 毛力 陈万涛 【摘要】 目的 探讨转染外源性Podoplanin基因对口腔白斑细胞增殖和细胞周期的影响，以证实 Podoplanin在 白斑癌变中的作用。方法 以口腔黏膜 白斑细胞系Leuk—l、转染 pCMV—Podoplanin表达质 粒 白斑细胞系A4—1和转染空白载体pCMV的白斑细胞系B4—1为细胞模型，应用荧光实时定量聚合酶 链反应 (PCR)检测转染 目的基因后细胞中PodoplaninmRNA水平的变化。激光共聚焦显微镜和蛋白质 印迹法观察转染目的基因后细胞中Podoplanin蛋白的定位和表达水平。甲基噻唑基四唑(M1Tr)法检测 转染 目的基因细胞增殖活性的变化。流式细胞仪检测过表达外源性Podoplanin后细胞周期分布的变化 情况。结果 转染外源性Podoplanin基因的A4—1细胞，mRNA相对表达量为0．022，明显高于B4—1细 胞的0．001及Leuk一1细胞的0．002(P0．05)；A4—1细胞 Podoplanin蛋白表达水平较B4—1和Leuk一1细 胞明显提高。免疫荧光结果表明，3种细胞的胞质及胞膜均可见Podoplanin蛋白的表达，A4一l细胞的蛋 白表达量(绿色荧光强度)明显高于 134-1和Leuk一1细胞。细胞生长曲线分析结果表明，A4—1细胞生长 速度明显高于Leuk一1细胞 ，A4—1接种后3d增殖活性比Leuk一1细胞高40．4％(P0．05)。细胞周期检 测结果显示 ，A4—1细胞处于G ～M期比例为(24．89±4．55)％，明显高于B4．1[(4．13±5．24)％]和 Leuk．1细胞[(4．694-7．42)％]，P0．05；A4—1细胞增殖指数(0．57±0．06)高于 134—1(0．41-40．04)及 Leuk．1(O．404-0．02)，P0．05。结论 口腔 白斑细胞过表达外源性Podoplanin蛋白后，细胞生长和增 殖能力明显增强；Podoplanin可能是口腔白斑细胞癌变的关键基因之一。 【关键词】 白斑，口腔；细胞增殖；细胞周期；Podoplanin EffectsofPodoplaninoncellproHfera~onandcellcycleinoralleukoplakiacells SUN Qiang， YANMing．ZHOUXiao-jian，L1Xin—ming ，MA0 Li，CHEN Wan—tao ． DepartmentofOraland MaxiUofacialSurgery， FirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052，China； DepartmentofOralandMaxillofacialSurgery，NinthPeoplesHospital，Col~geofStomatology，Shanghai Jiao UniversitySchoolof MedicineShanghaiResearchInstituteof Stomatology ShanghaiKey LaboratoryofStomatology．Shanghai2O00H ．China Correspond ing author：LlXin—ming，Email：lxming@ zzmedtacn，Tet：0086-371CHEN Wan—tao。 Emailchenwantao2o02@hotmaiLcon ．Tet：0o86_21 【Abstract】 0bjective ToinvestigatetheeffectsofPodoplaninoncellproliferationandcellcyclein oralleukoplakiacells．Methods Oralleukoplakiacellline(Leuk．1)transfectedwithpCMV—Podoplanin (A4—1)orpCMV (134—1)wasusedint