一种适用于PCR的土壤微生物DNA的提取方法.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2010，38(2)：6OO一601，619 责任编辑 李菲菲 责任校对 傅真治 一 种适用于 PCR的土壤微生物 DNA的提取方法 李惠敏，胡雪英，秦新民 (广西师范大学生命科学学院，广西桂林54l0o4) 摘要 [目的]对土壤微生物的DNA进行提取，以建立一种适用于PCR技术分析的土壤微生物DNA的快速提取方法。[方法]采用了2 种不同的直接裂解法提取土壤微生物DNA，并用细菌通用引物27F和 1492R进行PCR扩增 16SrDNA片段。[结果]2种方法提取的土 壤微生物总DNA电泳结果显示没有差别，但是只有CTAB、溶茵酶、冻融裂解法提取的总DNA不需要纯化，在增加Mg 用量的条件下， 只需用第一轮非特异PCR产物作为模板即可扩增出16SrDNA片段。[结论]CTAB、溶茵酶、冻融裂解法提取土壤DNA，方法操作简单、 快捷，同时适用于PCR分析，为土壤微生物群落结构的多样性分析奠定了基础。 关键词 土壤微生物DNA；提取；PCR；16SrDNA 中圈分类号 S154．34 文献标识码 A 文章编号 0517—66l1(2010)02—00600—02 AnExtractionMethodofSDilM icrobialDNA forPCRAnalysis U IIui-minetal (CollegeofLifeScience，GuangxiNormalUniversity．Guilin．Guangxi54100l4) Abstraet 【Objective】11leaimofthisstudywastoextractDNAfromsoilmicroorganismsandestablishtherapidextractionmethodofs0ilmi． crobiaIDNAforPCRnaalysis．[Method】Twokindsofdifferentdirectpyrolysismethodswereinvestigated．16Sr1)NAwasamplifiedwithbaeterial universalprimers27Fnad1492RbyPCR．IResuitlrrIleeleetrophoresisresultsoftotalDNAfromsoilmicroorganismsbvtwokindsofDNAex- tractionmethodshadnodifference．WithoutpurificationofT0lalDNA extractedbyCTAB，lyoszyme，freezingthawpyrolysismethod．thefirst．cycle non-specificPCRproductscouldbeusedastlletemplatetoamplify16SrDNAfragmentsundertheconditionsofaddingMg“amount．『Conelu． sionlSoilDNAcouldextractedbyCTAB，lyoszyme，rfeezingthawpyrolysismethod．Themethodwassimpleandfastinoperation。suitbaleforPCR naalysis．111eresearchprovidedthebasisforhtediversityanalysisof soilmiembialcommunities． Keywords SoilmierobialDNA：Extraetion：PcR；16SrDNA 土壤是微生物栖居的主要场所，微生物在土壤中的分布 1．1．2 试剂与仪器。TENP缓冲液(pH值8．0)：50mmol／L 及生命活动与土壤肥力、植物营养、植物病害和植被状况等 Tfis，20mmol／LEDTA，100mmol／LNaCI，l％ (w／v)PVP。 密切相关。因此，研究土壤微生物群落和多样性对有机物的 DNA提取液 I(pH值8．0)：100mmol／LTris，100mmol／LED- 形成和分解、土壤监测与生态环境改善等方面有着重要的意 TA，200mmol／LNaC1，2％ (W／V)PVP，2％ (w／v)CTAB。 义。现在广泛公认在环境样品中只有0．001％～15．000％的 DNA提取液I1(pH值8．0)