骨髓单个核细胞构建细胞化生物组织工程血管支架的实验与研究.pdf

骨髓单个核细胞构建细胞化生物组织工程血管支架的实验研究 骨髓单个核细胞构建细胞化生物组织 工程血管支架的实验研究 中文摘要 第一部分：鼠骨髓来源的内皮祖细胞的体外培养及 生物学特性的研究 目的将鼠骨髓来源的内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)诱导培养成 内皮细胞(endothelialcells，ECs)，鉴定并观察其在体外增殖、分化过程中相关细胞表 型的变化。 方法采用密度梯度离心方法获得鼠骨髓单个核细胞，分别用EGM．2培养剂进行 诱导分化(实验组)和普通培养基培养(对照组)，于培养4、7、10、14、21d，用 于诱导分化后的1、4、7、10、14、21d，用western blotting法检测VWF蛋白的水平， 用Kr-PCR和Real．timePCR法检i贝UVEGFR 诱导培养的细胞进行比较。 结果鼠骨髓单个核细胞在诱导培养的4d细胞开始贴壁，7d细胞大多变为梭形， 排列成“铺路石”样，而对照组的细胞生长状态差，形态不如典型的“铺路石”状； MTT结果表明10d时EPCs达增殖高峰(P0．05)；免疫染色表明，诱导培养7d的细 胞约90％呈VWF／CD34双荧光阳性，对照组的阳性率极低，随培养时间的延长阳性率 western d后表达 无增加； blo幽g结果表明，诱导培养1d的细胞无VWF表达，培养4 PCR结果表明，培养1 逐渐增强，10～14d达高峰，21d后稍减弱；Real．time d的细胞 FLKl和VWF的mRNA表达低(PO．01)，4d后表达逐渐增强，14d达高峰，21d后略 减少，未诱导细胞无表达。 结论本试验成功地从鼠骨髓单个核细胞中分离、诱导培养出EPCs，在其体外扩 1 骨髓单个核细胞构建细胞化生物组织工程血管支架的实验研究 中文摘要 增分化为成熟内皮细胞的过程中，PO～P3(1～21d)FLKl和VWF等内皮细胞标志蛋白 表达逐渐增强，P3(21d)后略有下降：而未加诱导的不能生长成内皮细胞。该细胞可 作为构建血管组织工程较为理想的内皮的种子细胞。 关键词内皮祖细胞；内皮细胞；血管新生；组织工程 第二部分·t鼠骨髓来源的平滑肌祖细胞培养、鉴定 及生物学特性的研究 muscle ．目的将鼠骨髓来源的平滑肌祖细胞(smoothprogenitorcells，SPCs)，诱导 muscle 培养成平滑肌细胞(smoothcells，SMCs)，鉴定并观察其在体外增殖、分化过程 中相关细胞表型的变化。 方法采用密度梯度离心方法获得鼠骨髓单个核细胞，用M．199条件培养剂进行 诱导其分化，于培养4、7、10、14、21 d，用免疫荧光双标技术(Q．SMA、CDl4)鉴 d，用westem 定SPCs。于诱导分化后的1、4、7、10、14、21 blotting法检测a．SMA 蛋白的水平，用RT-PCR和Real．time 导培养的细胞进行比较。 结果鼠骨髓单个核细胞在诱导培养的4d细胞开始贴壁，7d细胞大多变为梭 d 形，14d(第3代)融合时呈现典型的“峰”“谷样形态；免疫荧光染色表明，培养4 的细胞Q．SMA／CDl4开始出现双荧光阳性；western