L-半胱氨酸与牛血清白蛋白相互作用的荧光光谱分析.pdfVIP

亿 亏 与生 物 Z程 2013，Vo1．30No．8 团 Chemistry Bioengineering L一半胱氨酸与牛血清 白蛋白相互作用的荧光光谱分析 徐大玮 。毕玉琦 (1．山东省产品质量监督检验研 究院，山东 济南 250100；2．山东质量认证 中心 ，山东 济南 250014) 摘 要：运用荧光猝灭光谱 、同步荧光光谱探讨了L_半胱氨酸(L-Cys)与牛血清 白蛋 白(BSA)的相互作用，并计算了 猝灭常数、结合常数、结合位点数以及 3个热力学参数△H、△G和△s。结果表明．L-Cys使 BSA的内源荧光发生猝灭 · BSA的发射峰从 350am蓝移到 347．5nm，荧光猝灭机制为动态猝灭；L-Cys与BSA之间的作用力主要为疏水作用力； L-Cys对BSA结构的微环境有一定的影响。 关键词：L．半胱氨酸；牛血清 白蛋白；荧光猝灭光谱；同步荧光光谱 ；热力学参数 。 中图分类号：O657．3 文献标识码：A 文章编号：1672—5425(2013)O8一oO57一O4 L-半胱氨酸(L-Cysteine，L-Cys)是组成蛋 白质的 1．1 试剂与仪器 重要氨基酸之一，其结构中既有羧基、氨基，又有巯基 牛血清 白蛋 白(纯度98％)、L_半胱氨酸 (BR)， (一SH)，具有重要的生理药理功能。L-Cys能够合成 国药集团化学试剂有限公司；Tris试剂、NaC1，分析 谷胱甘肽，还能维持细胞 内外的氧化还原状态[1]，广泛 纯；二次去离子水 。 应用于生物医药 引、检测 、食品[等领域。在医药行 Ls一55型荧光仪，美国PerkinElmer公司；DF一 业，L-Cys的盐酸盐具有恢复肝功能的作用，其衍生物 101S型集热式恒温槽，巩义英峪仪器厂；FA2OO4B型 可以作为溶解性祛痰剂[2；在食品加工行业，L-Cys具 电子天平，上海精密仪器；PH一3C型酸度计，上海鹏 有很好的食品保鲜、抗氧化作用；另外人们还将它应用 顺 。 到化妆品行业中4【]。 1．2 方法 血清白蛋白能与进人体内的许多物质进行可逆结 1．2．1 溶液的配制 合，在体内起到贮存、转运物质的作用。因此，研究小 用电子天平准确称取 0．6057gTris试剂和 分子与血清白蛋白的相互作用对理解物质在体内的代 0．2925gNaC1，溶于 5OmL二次去离子水中，并与 谢、转运等作用机制具有重要意义。牛血清 白蛋白 42mL0．1mol·LI1的盐酸均匀混合，用二次去离子 (BSA)因与人血清 白蛋白(HSA)具有相似的结构，常 水定容至 100mL，用酸度计测其pH值为7．4，即得到 作为体外模型蛋白用于研究。 0．05mol·L-1pH=7．4的Tris—HC1缓冲溶液，溶液 目前，有关L-Cys与模型蛋白BSA相互作用的研 中NaC1的浓度为0．05otol·L一。 究还很少见，方盈盈等[5]探讨了L—Cys与BSA相互作 用上述 0．05mol·L Tris-HC1缓冲溶液配制 用的热转变曲线、变性温度和变性焓等，但是对于 L_ 浓度为 1．24×10 otol·L 的BSA溶液，低温保存， Cys与B