奶粉中亚硝酸盐的测定(修改2012.9).docVIP

奶粉中亚硝酸盐的测定—盐酸萘乙二胺法GB/T 5009.33—2008 第二法 分光光度法—亚硝酸盐和硝酸盐的测定 一、目的要求 1.熟悉掌握样品制备，提取的基本操作技能； 2.进一步学习并熟练地掌握分光光度计的使用方法和技能； 3.学习盐酸萘乙酸二胺分光光度法测定亚硝酸盐的原理及操作要点。 二、原理 试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量 三、试剂 106.0g亚铁氰化钾〔K4Fe（CN)6·3H2O]，用水溶解，并稀释至1000mL 。 5乙酸锌溶液（220 g/L）：称取220. 0 g乙酸锌[Zn（CH3COO)2·2H2O]，加30 mL冰乙酸溶于水，并稀释1000mL 。 6饱和硼砂溶液( 50 g/L)：称取5. 0 g硼酸钠，溶于100 mL热水中，冷却后备用。 7氨缓冲溶液(pH9. 6-9. 7)：量取30 mL盐酸（ρ=1. 19 g/mL)，加100 mL水，混匀后加65 mL 氨水(25%)，再加水稀释至1 000 mL，混匀。调节pH至9. 6～9. 7。 8稀氨缓冲液：量取50 mL氨缓冲溶液，加水稀释至500 mL，混匀。 9盐酸溶液(0.1 mol/L)：吸取5 mL盐酸，用水稀释至600 mL。 10对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）：称取0. 4 g对氨基苯磺酸，溶于100 mL 20%盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。 11盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取0. 2 g盐酸萘乙二胺，溶解于100 mL水中，混匀后，置棕色瓶中，避光保存。 12亚硝酸钠标准溶液：准确称取0. 1232 g于110 ℃～120 ℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解，移入500 mL容量瓶中，并稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于200μg的亚硝酸钠。 13亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液2.50 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5. 0 ug亚硝酸钠。 四、仪器 分析步骤 称取g混匀的试样，置于mL烧杯中，12.5 mL硼砂饱和液，搅拌均匀，吸取40. 0 mL上述滤液于50mL带塞比色管中，另吸取0.00、0.20、0.40、0.80、1.00、2.00 mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0，1，2，4，5，10 μg亚硝酸钠)，分别置于50 mL带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入2 mL对氨基苯磺酸溶液（4 g/L），混匀，静置3 min—5 min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L)，加水至刻度，混匀，静置15min，用cm比色皿，以零管调节零点，于波长538 nm处测吸光度，绘制标准曲线比较，同时做试剂空白。 结果计算 试样中亚硝酸盐的含量按下式进行计算。 式中： X—试样中亚硝酸盐的含量，单位为毫克每千克(mg/kg) ； m—试样质量，单位为克(g) ； A—测定用样液中亚硝酸盐的质量，单位为微克（μg） ； V1—试样处理液总体积，单位为毫升(mL)； V2—测定用样液体积，单位为毫升(mL) ； 计算结果保留两位有效数字。 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 2