糖复合物(Glycoconjugates).pptVIP

糖复合物主要有三种类型糖蛋白、糖脂和 蛋白聚糖 与脂类相连；与蛋白质相连，这又分为： N-连接型：聚糖通过N原子与蛋白质或脂类连接 O-连接型：聚糖通过O原子与蛋白质或脂类连接 糖复合物具有多种多样的功能 糖苷键的形成需要能量，由特异的酶催化。 反应需要 供体---- 核苷糖 受体---- 糖 酶---- 糖基转移酶催化 某些研究糖蛋白的重要方法 方 法 观 察 内 容 和 应 用 Periodic acid-Schiff试剂 电泳分离后糖蛋白条带染深粉红色 放射活性糖与细胞共培养测 电泳分离后的糖蛋白的放射性条带 Sepharose-lectin柱层析 纯化与特殊slectin连接的糖蛋糖肽 酸水解后的组成分析 鉴定糖蛋白含有的糖基及其含量 质谱分析 可提供分子组成，多糖的糖基排列顺 序以及糖链的分枝等信息 NMR谱分析确 确定特异的糖基及其排列顺序和糖苷连 (核磁共振) 接键的位置及异头性 甲基化分析 确定糖基的连接键 氨基酸或DNA序列分析测 测定蛋白质的氨基酸排列 凝集素及其应用简介 凝集素 是一类通过分子中的糖识别结构域，专一识别和结合特定糖基和糖链结构(使细胞凝集或糖复合物沉淀)的糖蛋白。 凝集素至少含两个糖基结合位点，蛋白质如只含一个糖基 结合位点则不能使细胞凝集或沉淀糖复合物。 三种常用的植物凝集素及其糖基特异性 凝集素 简 称 特 异 性 结 合 的 糖 基 Concanavalin A Con A Man 与 Glco Soybean lectinSB SBA Gal 与 GalNAc Wheat germ agglutinin WGA GlcNAc 与 NeuAc 凝集素检测糖链结构在恶性肿瘤研究和诊断中的应用 （1）N-糖链结构测定和恶性肿瘤诊断 原发性肝癌 临床常用诊断指标为甲胎蛋白AFP和肝型硷性磷酸酶L-ALP都是糖蛋白。已经发现肝癌中的AFP和L-ALP的蛋白一级结构分别与胎儿和正常肝的并无区别，而其糖链部分确有明显不同，可用凝集素来加以分辨。 AFP LCA结合力高的含量明显大于肝炎病人血清, LCA/E-PHA , LCA/Con A也比正常人及慢性肝炎等 L-ALP 此为一种二聚体，每一亚基含一条糖链。血清中ALP 来源于肝脏与骨骼，两者的糖链结构与末端唾液酸数目不同，来自骨骼的B-ALP可与WGA结合（可能含末端唾液酸数多或还含bis-GlcNAc）。此外，原发性肝癌含有与WGA结合特别强的组分，可用亲和层析区分。一般看来肝病越发展成慢性则合成的L-ALP和DSA结合能力越强。 肾细胞癌 其GGT的糖链变化，有和ConA的结合增强等变化。 滋养层细胞恶性肿瘤 （2）O-GalNAc糖链结构测定和恶性肿瘤的诊断 多数糖蛋白是膜结合蛋白(在膜结合多聚核糖核蛋白体合成) 故O-连接多肽和其他糖蛋白是由m-RNA编码的。O-糖苷型寡糖链糖基由核苷酸糖提供，在糖基转移酶催化下逐步添加的。 每一特异糖苷键的合成均需相应特异的糖基转移酶的作用, 催化糖链内部糖基的酶位于内质网， 第一个糖基添加发生在蛋白质翻译过程中,末端糖基位于Golgi器 合成特点有 （1）系列膜结合糖苷转移酶参与，糖基逐一添加方式进行的； （2）一糖基转移酶特异的催化形成一 特殊糖苷键； （3）数酶位于Golgi器的不同部位； （4） 糖基化反应由相应的核苷酸糖参与； （5） 反应过程没有寡糖焦磷酸长醇参与,不包含糖苷酶作用， （6） O-糖基化发生在一定的Ser或Thr残基，是伴翻译过程。 有些细胞表面蛋白有黏蛋白样结合域（MLD) LDL受体 与配基结合