呋喃果糖苷酶活力高效液相色谱检测法的建立.pdfVIP

13一呋喃果糖苷酶活力高效液相色谱检测法的建立 邵佩 霞 (华南理工大学轻工与食品学院，广州 510640) 摘 要：B一呋喃果糖苷酶被广泛应用于功能性食品低聚果糖的生产，它同时具有水解活力和转移活力， 在不同条件下，两种活力分布并不一致。本文 比较了B一呋喃果糖苷酶活力的三种测定方法。采用3，5一二 硝基水杨酸 (DNS)法，样品处理简单、成本低廉，但准确度低 ，宜于工业化生产和实验室粗放测定时使用； 测总还原糖和葡萄糖联用法 ，是对 DNS法的改进 ，但操作复杂 、误差较大；高效液相色谱检测法，操作成本 较高，但具有灵敏度和准确度高的特点。建立 了B一呋喃果糖苷酶活力的高效液相色谱检测法，以浓度为 25％ (w／V)的蔗糖为酶反应底物，通过检测反应体系中葡萄糖和果糖的含量可准确计算 B一呋喃果糖苷酶 的水解活力和转移活力，实验结果令人满意。 关键词：p一呋喃果糖苷酶；水解活力；转移活力；高效液相色谱检测法 中图分类号：TS201．2+5 文献标识码：A 文章编号：1006—2513(2010)02—0217—05 Assayofbeta—·-fructofuranosidaseactivitybyhigh performanceliquidchromatography SHAo Pei．xia (CollegeofLightIndustryandFoodScience，SouthChinaUniversity ofTechnology，Guangzhou510640) Abstract：Beta—fructofuranosidasehasbeenwidelyusedinfructooligosaccharidesproduction，italsohashydrolysis andtransferactivity．Indifferentconditions，twotypesofactivitydistributionisnotuniform．Threemethodsofactiviyt detemrinationwerecompraedinthispaper．The3，5一dinitrosalicylicacid (DNS)mehtodwithsimplesamplepro- cessingandlow cost，butlow accuracy，issuitableforindustrialproductionnadlbaoratorydetermination．Th etotalre— ducingsugarandglucosedetemrinationmethodwit}lcomplexoperationandlragererrorishteimprovementofDNSmeth— od．Thehighperfomranceliquidchromatography (HPLC)methodwithhigheroperationcostshashighsensitiviytnad accuracy．TheHPLCmethodwith25％ (w／v)sucroseastheenzymereactionsubstrateWasestbalished．Thehydrol— ysisnadtransferactivityofbeta—fructofuranosidasecouldbeaccuratelycalculatedbytestingthecontentsofglucoseand fructose，andhteexperimenthadsatisfactoryresults． Keywords：beta—fructofurna osidase；hydrolysisactivity；trna sferactiviyt；HPLC 13一呋喃果糖苷酶 (EC3．2．1．26)不仅可以 给含有羟基的受体 。因此， 一呋喃果糖苷酶同