发酵实验技术.pdfVIP

实验一 微生物(酵母)的培养基优化 (指导教师:汪文俊 熊海容 王海英 肖新才 实验员: 张继泰) 一．实验目的： 掌握微生物斜面培养基、种子培养基及发酵培养基确定方法，学会对已确定菌种确定实 验室发酵工艺。 二．实验原理 生物量的测定方法有比浊法和直接称重法等。由于酵母在液体深层通气发酵过程中是以 均一混浊液的状态存在的，所以可以采用直接比色法进行测定。 三．仪器与试剂 全恒温振荡培养 ，分光光度计、电热恒温水浴槽、天平、电炉。试剂为葡萄糖、蔗糖、 酵母浸粉、KH PO 。 2 4 四．实验方法 ( 1)、培养基的配制(见表1,2) 表1 正交表试验设计 因素水平 葡萄糖 蔗糖 酵母膏 KH PO 2 4 1 1.0 0.0 0.5 0.5 2 2.0 1.0 1.0 1.0 3 3.0 2.0 2.0 2.0 表 2 正交表实验方案 葡 蔗 酵 KH PO 生物量 （OD ） 2 4 编号 萄糖 糖 母膏 （D ） 0h 12h 24h 36h 48h 60h (A) (B) (C) 1 ( 1) ( 1) ( 1) ( 1) 2 ( 1) (2) (2) (2) 3 ( 1) (3) (3) (3) 4 (2) ( 1) (2) (3) 5 (2) (2) (3) ( 1) 6 (2) (3) ( 1) (2) 7 (3) ( 1) (3) (2) 8 (3) (2) ( 1) (3) 9 (3) (3) (2) ( 1) （2 ）将上述培养基配制好以后，每250 ml 三角瓶装入培养基100 ml ，于121 下灭菌 30 min，冷却。 （3 ）冷却后接种 （接种量为5％），置于28 ℃培养 进行培养。 1 生物秀-专心做生物 www . （4 ）测OD 值：将接种0 h、 12 h、24 h、36 h、48 h、60 h 不同时间的菌悬液摇均匀 后于560nm 波长、1cm 比色皿中测定0D 值。比色测定时，用以未接种的培养基作空白对照， 并将0D 值填入表中，最终确定最佳培养基的组成及发酵时间。 五．思考题 ( 1)比浊计数在生产实践中有何应用价值? (2)本实验为什么采用560nm 波长测定酵母菌悬液的光密度？如果你在实验中需 测定 大肠杆菌生长的OD 值，你