发酵工艺放大的优化.pdfVIP

2003 年　第 26 卷　第 2 期 — 6 1 — 发酵工艺放大的优化 　　摘要　发酵工艺的优化有多种 目的, 通过优化以期增加成品的产量, 但优化过程必须遵循药 品生产质量管理规范(GM P ) 原则、有效利用现有的设备并符合预期的最终生产规模。经基因修饰 超量产生重组蛋白的微生物具有优势, 绝大多数工艺仅采用三类菌种, 即大肠杆菌、酿酒酵母和巴 氏毕赤酵母。本文概括了作者为保证生物制药发酵工艺放大方法的有效性所设计的一些基本原 理。 　　关键词　优化　发酵工艺　表达　放大 　　在项 目可行性策略分析中包括发酵工艺 组成型表达还是诱导型表达。表达产物是在 的优化, 一旦证明所选菌种可用于生产, 优化 胞质区室还是分泌到外周培养液中。如果菌 工作即已开始, 表明已经构建出了表达系统, 株是从本实验室外获得的, 必须对原始菌株 至少从理论上应该将表达系统视为已优化系 来源和克隆步骤的质控文件进行评估, 并需 统。在进行漫长而又昂贵的优化工作之前, 建 获得具有资质的质量保证部门批准后才能使 立稳定的菌株非常重要, 至少需要保持从细 用。 ( ) 胞库建立到大规模发酵 包括预培养 所需代 应优化 目的基因的密码子使用以促进其 次的稳定。以质粒为基础的表达系统有时不 在选定微生物中的表达。必须立即通过摇瓶 稳定, 有几个参数能够影响质粒的分离不稳 培养进行表达水平筛选, 从而发现能够高水 定性。每种质粒的稳定性各不相同, 这取决于 平表达重组蛋白的克隆。 宿主菌株, 高度的不稳定性与低拷贝数质粒 培养条件的优化 有关。插入的DN A 大小影响质粒的稳定性: 优化的主要 目的是尽可能地提高产量, ( 质粒越大越不稳定。培养条件 如温度、培养 该过程可从实验室规模的纯化工艺开始, 采 ) 基组成和生长速率等 也能改变质粒的稳定 用最少量的现有质控工具来定量和评估产品 性。对数生长期后期质粒丢失非常明显, 基因 质量。发酵程序影响杂质类型, 进而严重影响 表达期间质粒的不稳定性增加, 经常应用抗 下游加工( ) 的功效。同样, 发酵条件能够 D SP 生素来稳定质粒。由质粒编码补偿宿主的营 决定 目的蛋白是以可溶性形式还是以不溶性 养缺陷比用抗生素调节更为合适, 然而营养 形式存在, 这进一步影响D SP 和纯化产品的 缺陷型菌株培养基的制备非常繁琐。插入 质量和产量。在高产菌株中, 超量产生也能造 ( ) 基因座可 以稳定质粒, 通过 成某些因子耗竭, 而这些因子对于维持蛋白 p arB hok sok 质粒的分离能杀死丢失质粒的细胞。另一种 质的良好构象是必需的。因此, 发酵条件的优 情况是将插入的DN A 片段整合到宿主染色 化必须与提纯工艺的优化同步进行, 因为它 体中, 常见的例子是巴氏毕赤酵母构建体, 但 们之间彼此相互影响。发酵工艺和D SP 开发 基因整合后会降低基因表达水平。 人员之间的交流质量是工艺放大成功的关 生产菌株