乳酸乳球菌细胞壁蛋白酶的分离纯化.pdfVIP

388 2DD＆ 正29，No．10 良 品 科 学 ※生物工程 乳酸乳球菌细胞壁蛋白酶的分离纯化 郭宇星，潘道东 (南京师范大学乳品生物技术研究所，江苏 南京 210097) 摘 要：本研究确定了分离纯化乳酸乳球菌细胞壁蛋白酶(CEP)的最佳技术路线。用裂解液(50mmol／LTris—HC1， 2mmol／LEDTA．Na，100mmol／LNaC1，0．5％Tritonx．100，lmg／ml溶菌酶，pH8．5)悬浮菌体(20ml／g)，37℃下保 温3h，离心后取上清液即为粗酶液。粗酶液通过45％硫酸铵沉淀，DEAE．SephadexA．25和Sephacryl—S．300HR两 步层析，可以得到纯化的细胞壁蛋白酶。蛋白酶提纯倍数达到74．048％，最后回收率为 14．865％，PAGE电泳检 测为一条带，SDS—PAGE检测蛋白酶为单体结构，分子量大约为53kD。用纯化后CEP酶解乳清蛋白，酶解液ACE 抑制率为45％。 关键词：ACE抑制活性；乳酸乳球菌；细胞壁蛋白酶 IsolationandPurificationofCell-envelopeProteinasefromLactococcuslactissubsp．1actis GUO Yu—xing，PAN Dao—dong (InstituteofDairyBiotechnology，NanjingNormalUniversity，Nanjing 210097，China) Abstract：Inthisstudy，theisolationandpurificationprocessofcell—envelopeproteinase(CEP)fromLactococcuslactissubsp． 1actisisdeterminedasfollows：suspendingthewashde Zaclococcuslactissubsp．1actiscellsby50mmol／LTris—HC1(pH7．8)in lysisbuffersolution (50mmol／LTris—HC1，2mmol／LEDTA，100mmol／LNaC1，0．5％Tritonx一100nad1mg／mllysozyme， pH8．5)attheratioof1：20fg／m1)nadthenincubatingthesuspensionfor3hat37℃，centrifugatinghtesuspensionnad thencollectingthesupematant(crudecell—envelopeproteinasesolution)，fractionallyprecipitatinghtecellwallproteinaseby adding25％，45％nad65％ammonium sulfateintohtesupematant，andpurifyinghtecurdepmteinasebyDEAES·ephadexA- 25andSephacryl—S-300HRcolumnchromatographysuccessively．Theenzymeispurifiedbyabout74foldsfrom htecurde cell-envelope proteinasesolutionandhtehterecoveryofactiviytisabout14．87％．Thepurifide enzymeshowesasingleprotein bandonnativePAGEpattern，nadithasamonomerstructureandthemolecularmassofabout53kD bySAS—PAGE．The angiotensiconvertingenzyme(ACE)inhibitoryrateofwheyproteinhydrolyzatebythepurifiedenzymeis45％． Keywords：ACEinhibitory activity；Lactoco