人MGMT基因Cdna的克隆表达及表达蛋白修复功能的鉴定.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’( ) ! *’ )# 年 月 $%%! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,(- $%%! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 人!!# 基因$%’ 的克隆表达及表达蛋白修复功能的鉴定 朱玉文 刘建国 黎高翔 （中国科学院微生物研究所，北京 !%%%5% ） 0 摘 要 克隆了 细胞 甲基鸟嘌呤 甲基转移酶（ ）基因的 序列，该序列与国外发表的 B4(7 C . .D*E. FGF3 AD*E AD*E 完全一致。将此 插入原核表达载体 后转化大肠杆菌 （ ）获得表达的重组菌株 AD*E H93.$!7 IJ$! D9/ H93.$!7.FGF3K （ ），经 诱导后产生分子量为 的蛋白质。烷化类诱变剂致死突变实验表明， 蛋白的 3 ) 0(,# IJ$! D9/ LM3G $#ND FGF3 表达能修复受体菌D*E 分子因烷化类诱变剂导致的突变。 关键词 0 甲基鸟嘌呤 甲基转移酶，烷化剂，基因克隆表达， 分子修复 C . .D*E. D*E 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） O51 E !%%%./%0! $%%! %#.%/10.%# 0 甲基 鸟 嘌 呤 甲基 转 移 酶 （ 些特异性烷化剂的抗性。这为进一步研究该基因的 C . .D*E. 9P $ Q !Q !Q0/）简称FGF3，广泛存在于各种生物体的细 细胞癌变不同阶段的表达及其与细胞癌变的关系和 胞中，主要功能是将甲基化D*E 分子中鸟嘌呤第0 FGF3 蛋白的作用机理等打下了基础。 位氧原子上的烷基共价转移到酶的活性中心 残 P-? ( 材料和方法 基上，修复D*E 分子的烷基化损伤。同时因酶自身 构象发生变化而失去活性，迅速被细胞内蛋白酶降 () ( 菌株、质粒和细胞 ［，］ 解! $ 。人编码 的基因位于 号染色体长臂 大肠杆菌 和 （ ），质粒 FGF3 !% DB2! IJ$! D9/ HI(,4?AV;HY 上，全长超过 ，包括 个外显子。转录的 Z[ 由本组保存，质粒 H93.$!7 购自*’\4=4@4 公司。 $0R !%NS 2 成熟 为 ，编码区 编