尿液代谢组样品制备以和影响因素研究.pdfVIP

里士主堑垒型墨堡堂茎整堂垒垦垡墨垦墨金鱼丛堡塞墨 P_G019 尿液代谢组样品制备以及影响因素研究 汪江山， 黄强， 陈世礼，赵欣捷，尹沛源， 许国旺 中国科学院大连化学物理研究所国家色谱分析中心，辽中大连中山路457号116023 以UPLC-MS为检测方法．采用D～最优化设计优化了尿液样本制备方法井考察了酸、碱、温 度等多种因素对尿中代谢物的影响。结果表明，吼水为稀样{{莩剂研获得更多的代谢物信息，过氧化 氢对代谢物肜响毋人。 关键词：超高效液相色谱、色谱质谱联用、代谢组学、尿液、影响冈素 l引言 尿藏娃代谢组学中常用的生物样本，其优点在于”非侵入性无损取样：2)可连续取样：3) 屎液体现的是备组织器官代谢表达的练台信息。这种生物样本的复杂性也是显而易见的，所禽代谢 物的种类非常之JI泛，不同代谢物浓度差异巨太且多数代谢物结构来知。代谢组学的目标是测定尽 可能多的代谢物．有必要研究样品制备方法以及各种阁素对尿液代谢组的影响。 2实验部分 1)太鼠屎渡采集：Wistar大乳麒液使片{代谢笼收集“小时尿样井置丁一80C冰箱保存。临用 前室温解珠井离心墩上清液作为供试品。 2)超高敬液相色谱质谱联用：色谱柱为^cqu时C18柱，杜温35℃．进样盘5止．流动相A为 O1％甲醴水溶渡，B#J乙脯；梯度洗脱。柱后流出液不经分流直接导入质诺系统检测。质谱使用电 喷雾离子源(ES0iE离子模式检测：质量扫描范围毗100～850。 3)数据处理：实验设计和分析软件为MODDE，峰检测和匹配采用XCM$软仆；化学计堑学模 型建立采用SiMCA-PIl。 3结果与讨论 1)尿液稀释溶剂的影响：屎液经水、甲醇、乙腈以及其不同配比溶渡稀释．研究发现稀释溶剂 对检测到的色带峰的数目和总峰面积有显著的影响。以水为稀释溶剂能够最大限度获取屎液中的信 鼠。目l显示的是不同配比的稀释溶荆对总峰面积的影响。 氨 瞬I不同配比的稀释幡剂对总峰面目的影响 2)酸、碱普因素对尿中代谢物的影响 大鼠屎液中在采集、贮存和处理过程中受多种因紊的影响．使得代谢物发生变化。我们考察 了甲酸、氨水、蔷i【度、过氧化氢、以及反复冻融对抹中代谢物的影响。以色谱峰数、总峰面积和主 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 成分分析得分图上与对照样本的距离等三项指标采用偏最小二乘(PLS)的方法对各影响因素建立 数学模型，发现过氧化氢对尿液代谢物的影响最大。表1显示的是各种因素对尿中代谢物影响的大 小。 表l基于PLS模型的影响因索排序 4结论 尿中代谢物对氧化性试剂最为敏感，其次为弱碱和弱酸。提示在样品采集和预处理过程中应避 免酸、碱和氧化。尿液样品预处理的稀释溶剂对信息量有影响，以水为稀释溶剂能最大限度保留尿一 中代谢物的信息。