小麦外源DNA导入及转化的初步研究PreliminaryStudyontheIntroductionandTransformationof.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)15(5):19-221993 小麦外源DNA导入及转化的初步研究 孔 青 徐乃瑜 林 琼 武（汉大学生物系，武汉 430072) 采用改进的酚-RNA酶法从野生一粒、野生二粒、提莫菲维和波兰小麦幼苗中提取总DNA,用了 房注射法和花粉管途径导入云南铁壳麦I号和湖北生产上应用的鄂恩1号小麦，发现D，代出现供休性状 或新的变异性状，有些变异性能遗传到后代． 关键词 外源DNA，导人，转化，子房注射，花粉管途径 PreliminaryStudyontheIntroductionandTransformation ofExogenousDNAofWheat KongQing XuNaiyu LinQiong (DepartmentofBiology,WuhanUniversity,Wuhan430072) 近年来，随着生物技术的术展，把外来遗传基因转移到植物休内，已出现了抗病、抗虫和抗 除草剂的转基因植物。因为农作物的许多重要经济性状由多基因决定，寻找和获得这些 目的基因 还比较困难。周光宇CI）根据远缘杂交出现的一些变异现象，提出染色休水平以下的DNA片段 杂交的假设，并设计了授粉后外源DNA导人植物的技术。1978年以来，利用这一技术在棉 花、水稻等作物上成功地转移了不同来源的抗病性和其它有益性状的基因 2-〔ion 这些资料表 明：授粉后导人外源DNA是一条比较简便、快速引起变异进行分子育种的途径。从1987年开 始，我们对小麦种间外源DNA的导人及转化进行了研究，现予报道。 材 料 与 方 法 一（）实验材料 1．受休材料 选用云铁 1号 （TriticumacstivumsspYunnanseKing）和鄂恩 l号 (T.aestivumL)，染色体组型均为AABBDD,2n=42；前者芽鞘淡红，叶耳淡绿，株高130厘 米，穗呈圆锥形，无芒，生育期长，种f红色。后者叶鞘绿色，叶耳淡绿色或淡红色，株高100 厘米，穗呈纺锤形，长芒、白壳、红粒。 2．供休材料 (1（)野生一粒小麦T（.aegilopoidesBal.),染色休组型为AA,2n=14;叶片 有粗硬茸毛，穗小，细而扁平，穗轴易断，护颖脊明显，苗期株形甸旬，种子蛋白质含量高，抗 n-卜锈、条锈和白粉病。(2)野生二粒小麦 (T.dicoccoidesKorn),AABB,2n=28;芽鞘叶鞘均 为深紫色，叶鞘及叶而多茸毛，株高140厘米，具粗糙长芒，护颖脊明显，穗轴节周围有密毛， 小穗基部有长毛，粒长、红色、硬质、蛋白质含量高达20％以上。(3)波兰小麦 T（.polonicum 19 · L.),AABB,2n=28，叶鞘叶耳为淡绿色，纺锤形大穗，护颖极长，膜质，长芒，粒大而长， 玻璃质，蛋白质含量高达20％左右，茎秆蜡粉多，抗白粉病．(4）提莫菲维小麦 (T.timopheevi Zhuk.),AAGG,2n=28；叶鞘及叶片上有刚毛，穗扁平略内卷，有茸毛，具柔软的芒；粒小 呈扁平状，蛋白质含量高达20％左右．对白粉、条锈和叶锈有综合免疫性，并抗多种虫害， 二（）实验方法 1.DNA的提取 采用改良和饱和酚一RNA酶法，将幼叶捣碎匀浆的提取液，分别以饱 和酚、氯仿抽提，然后加预冷乙醇在一20℃过夜，翌日取出离心，倾去上清，壁上析出的即为粗 提DNA．再用SSC溶解DNA，加人RNase溶液，在37℃保温30分钟消化RNA．再用饱和 酚和氯仿分别抽提1次，加预冷乙醇在一20℃过夜，翌日离心取沉淀即为纯DNA. 2.DNA纯度和分子量测定 应用751型紫外分光光度计测波长260nm/280nm的光吸 收值之比值＞1.97-2.06表明蛋白质仅为痕迹量。并用 1%琼脂糖凝胶电泳，计算DNA分子 量． 3．外源DNA的导人 1（)子房注射法：在受体小麦人工自花授粉后1-3天，用毛细玻璃 针插人子房下部胚囊附近，借助微量进样