影响牛PCR胚胎性别鉴定反应率的因素分析.pdfVIP

·146 · 经验交流 中国畜牧兽医 　2007 年第 34 卷第 6 期 影响牛 PCR 胚胎性别鉴定反应率的因素分析 1 2 1 ,2 1 ,2 金方 ,房义 ,余文莉 ,李树静 ( 1. 北京安伯胚胎生物技术中心 ,北京 　100 107 ;2 . 河北农业大学动物科技学院 ,保定 　07 100 1) 摘要 :本研究对影响牛 PCR 胚胎性别鉴定反应率的因素进行了分析 , 以提高胚胎性别鉴定效率 。结果表明取样时样品中 加入透明带残片使 PCR 反应率显著降低 ;取样大于等于 5 个细胞组 PCR 反应率显著高于取样 1～4 个细胞组 ;取样为死细胞 和散细胞组的反应率略高于取样为活细胞组 ,但二者无显著差异 ;胚胎质量对反应率无显著影响 ;桑椹胚和早期囊胚的反应 率显著低于囊胚和扩张囊胚 ,囊胚和扩张囊胚间差异不显著 。 关键词 :牛 ; PCR ;胚胎性别鉴定 ;反应率 中图分类号 :S814 . 8 　　　　　文献标识码 :B 　　　　　文章编号 :167 17236 (2007) 060 14603 ( ) ( ) 　　自从 Her r 等 1990 首次用 PCR 技术扩增牛 Y 雌性和雄性扩增对照样品 AB Technology 和自制 。 染色体特异性序列经电泳对牛胚胎进行了性别鉴定 1 . 2 　方法 成功后 ,PCR 方法胚胎性别鉴定技术成为了世界上 1 . 2 . 1 　胚胎生产 　供体牛用 CID RF SH 法超排 , 最流行的胚胎性别鉴定方法 。但是成功的方法并不 用常规非手术法采集胚胎 。胚胎在 20 ～25 ℃环境 一定能产生成功的结果 。在奶牛胚胎性别鉴定技术 下 ,冷冻前保存在 HOL D IN G 液中。 商业化运作中 ,其效益的发挥受到反应率 、准确率和 1 . 2 . 2 　胚胎取样 　将胚胎分割仪与倒置显微镜固 移植妊娠率等诸多因素的影响 。作者以提高胚胎性 定在一起 ,将一特制的显微分割刀固定在显微操作 别反应率为 目的 ,分析透明带残片 、取样大小 、细胞 μ 仪的操作手上 ,在 60 mm 分割平皿中做一个 50 l 活性 、胚胎发育阶段和胚胎质量等对 PCR 反应率的 的 SPL I T T IN G 滴 ,每个胚胎在取样前先在 SPL I T 影响 ,从而选取适宜的样品 ,即可获得理想的反应率 T IN G 液中洗 5 遍 ,将洗好的胚胎放入其中。胚胎 又能保证可接受的妊娠率 。通过对不同质量级别胚 很容易粘到平皿底面 。胚胎被放大 100 倍进行分割 胎的鉴定以期提高胚胎的利用率 。 取样 。理想的情况下 ,在桑椹胚的边缘或囊胚的滋 1 　材料和方法 养层切取由5～6 个细胞组成的小块 。每个胚胎取 1 . 1 　材料 样后 ,分割刀依次在纯水 、95 % 乙醇 、纯水 、SPL I T 1 . 1 . 1 　胚胎 　取自超排发情后 7～7 . 5 d 的高产荷