劳倦过度、房室不节-肾阳虚鼠模型脑基因芯片的研究.pdfVIP

“劳倦过度、房室不节’’肾阳虑鼠模塑脑基因芯片研究 杨裕华李震 山泶省济涛淞媛嫡预防控制巾心，济南市250014 山家赣济南麓巾医药大擎， 济南维250014 美缱诵：琰叮A芯片：肾|飘媲：幼锄摸璧；随脓 纂因芯片遵以犬擐靶繁阏片段翁缛地、黼锈度地阑定税玻片、硅游载体一k的～硕技术。聪蕊阏交迭潜 芯片是霸前廒用较广泛的蒸因芯片。，慰以死千个纂因特黪的探针蠛其cⅨ叮A片段阑定≯一块藻湖：薄片上， 对米臼举同的个体、不问组织、不网细胞周期、幂网发商阶段、不同痫变、举隧蒯激一F的细胞国mRNA 或逆转录声物cD夺渔避行捻铡，从耐瓣这些蒸戮的表选特性进行综台分析和翔断。 燕子臀阳虚，现认为怒下胫躲一潼体一靶腺《肾上腺、甲状腺、性腺搜勰腺)轴的改变，箨髓“F程躺 (或下旺脑以上)为其调节中枢。率姘究威闵诱簿疲势过度、腐寰珥；带建立肾嬲虚小鼠模型，辩戬龌因芯 片捻测鼠脑基因，精程探讨j!lI这种劣法所建骥型的鼠臁纂嘲的调繁变化，从聪为避一步研究补肾中药纣肾 阳斑鼠模型影响的基因改变夔迩基础。 1材料与方法 1．1横型制作 L1．1材料 墩2耻339融明种继魔雄性小I皇漩25烈，随机分为两缀，辩照缀10强，邋模组15只。遗横组姆罔，}ll= 每强雄鼠备舄6 SA生产批垮 j{雕鼠凝笼。辩将健康雌鼠姆灭灌锷缆漩雌=簿混悬渡(法阂Sch眺g 037B一2)o．5mL(禽药O，oo矩8mg)，雌鼠进入动情期，以瞬邋涂片检蠢角化缭胞证蜜之。以长4S锄、掇28 cm和礴30cm长方彤骥料水槠，水深25c溉承澈28qO℃，供雄性小国鼠游泳。 1．1．2方法 I豇／鼹。喂养达4周。造模缀：15j__=l雄 对照组：lO贝雄毂小囱鼠闷麓常燧焖葬，每天灌胃熬馏水0．5 性小翔鼠，分别按l：6的罐：瓣比例网笼喂薅，并且每天换笼一次(圈栩时每贩雄鼠每必的6鼹雌鼠都 不阐)，以此诱簿秘璧举节；雄性小鼠每天下午游泳1次，每次3{¨柏撒iIl，以此诱导其努倦过度。 1．2脑组织总砌嗵A提取 将对照缀和模型组二F观察期4闱麟，小鼠颈椎脱臼法处死，乎荧骨骨缝处剪除骨片，究熬驭m小鼠垒 栓。 ¨对样品黜呵A进行荧光标记 1．3．1所用3暇脚婚嗽e酽∞mearr醇芯片 该芯片购囱j幻拄鞲舆生物窝限公司，泼芯尽炎翁约35852蔡70 m叮长度的0IigoDNA。来自Foler潍 公诩的小鼠捻麓因组CIhgo麾，M明靶G㈣Ⅵ懿i洮4．0．旗代表‘r约25O|Do个糕网，3800Q个转泶奉。 芯片l_：!：的样晶还包括小鼠的4个餐容耩阑作为阳性对照，H懿炸为点棒阳性对照，点样溶液SO％DMSO 作为阴性对照。 13．2双链c弱妊合戚 取 5 g 删鼢限 ． 以 T7 一 伽go ( dT ) ， 取镶合成厩用PCRNuc-∞Sp纽蜘ctⅡKjt㈣纯化。 10．3体外转录合威c融吁A 用bR曲酾弛X E印北鹳L烈ge cID淀：然厢用IblAa材n_mK赶㈣纯化。 13．4随机弓l物反转最 驻2g 物用P(鼠N眦leospiIl融tⅡ砥t㈣纯他。 1．3．5 cDNA用轧E黼w酶标记 120M，dCrP终浓艘为60M， Cv5硼0Tp、ey3硼0TP终浓陂为40M。e，5一dcTP、Cy3一dcllP (Am盯妨a瑚Ph矧蕊cia 翊)；＆Hl翻mn]im胜，9嬲(。蹦每撼骏生物技术蠢限公蠲)。阻CⅪ3椿记对照组样龋．以Cy5撅记模型缀 栉晶。 10．6杂交与清洗 30 标记的D】qA溶二FL杂瓮激l扣(3×SSC，O．2％SDS，5×D醐豫rt’s25％甲酰麟)，一F42℃杂交过檄。杂 m虹。玻片 交缡柬腐，先在42℃澎右含O．2％SDS，2xSSC的液体中洗5m遮，瓣后猩O．2xSSC中寰温漉5 甩