表达新城疫病毒HN基因重组禽腺病毒地研究.pdfVIP

表达新城疫病毒HN基因重组禽腺病毒的研究★ 李刚① 李伟① 范晓娟① BerhaneYohannes②BeataStachowiacke’ (①中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京，100081) (②加拿大奎尔夫大学安大略兽医学院，奎尔夫，N1G2W1) 【摘要】血凝素一神经氨酸酶(HN)是新城疫病毒(NDV)的主要免疫抗原之一。在这项研究 中，我们通过将HN基因同源重组进禽腺病毒构建重组病毒rFAdV-9，并且在禽腺病毒晚期启动子的 控制下表达NDV的HN基因，运用northern blot，RT-PCR和放射免疫沉淀的方法检测到HN基因的 表达，希望可以用这种重组病毒制得较好的预防NDV的基因工程疫苗。 【关键词】新城疫病毒；血凝素一神经氨酸酶；重组病毒 新城疫病毒(Newcastledisease virus，NDV))能够引起禽类急性、高度接触性、致死性传染病，被 国际兽疫局(OIE)列为对禽危害最大的A类传染病之一。新城疫病毒感染的宿主主要包括鸡、野鸡、 火鸡、鸭、鹅以及其它家养和野生的禽类，是一种可以广泛传播、对养禽业具有很大破坏性的病毒性传 酶(HN)和大分子蛋白(L)在内的六种结构蛋白组成，HN在介导病毒与宿主细胞上病毒受体的结合 起着重要的作用，同时它也参与了被感染细胞与其它细胞的相互粘合，因此，HN基因是机体产生对 NDV免疫应答的重要基因之一Il】。 禽腺病毒可以作为口服疫苗的载体，并且可以诱导黏膜免疫。在本研究中，我们构建表达新城疫病 基因(rFAdV-HN)。期望这种重组病毒可以被作为一种较可以作为预防NDV的口服基因工程疫苗。 1．材料和方法 1．1材料构建重组病毒所需的质粒、细胞由加拿大奎尔夫大学安大略兽医学院Dr．Eva Nagy及 Davor ojikic提供‘21。 1．2方法 1．2．1克隆及同源重组 将获得的kiN A Sal．HN线形化， cDNA插pFAdV-9载体中获得重组的pF△Sal—HN质粒，然后将pF 与FAdV-9病毒DNA共转化到BJ5138 加拿大国家自然科学基金(NSERC)项目、兽医科学博士基金(DVSc)项目 李刚(1958-)男，教授，博导。研究方向：动物传染病防制。Email：gli358@gamil．corn —乇74— 将得到的线性FAdV-HN用脂质体方法转染人CH·SAH细胞。(图1) Collstnlctlollofthe型tlalb女fervectorofFIN genie 照囝 玉 S一 哦(● 以 l…山则…1b… l魄IH。 is l血筋比如with黝el pEAdX·HN cells mid CH—SAH cI=m塔＆媳妇into l filerecombm,uR H,u弋est E