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学术研究 弓形虫病核酸诊断技术研究进展 邓文星 （柳州鹿寨县动物疫病预防控制中心广西柳州545600 ） 摘 要：弓形虫病是一种危害严重的人兽共患病，临床快速诊断是成功控制该病的关键。本文就探针、 PCR 等核酸诊断技术在弓形病诊断中的应用情况进行了综述。 关键词：弓形虫病；核酸诊断技术；进展 Research Progress of Nucleic Acid Diagnosis of Toxoplasmosis Deng Wenxing （Luzhai county animal disease prevention and control center ，Liuzhou Guangxi, 545600 ） Abstract: Toxoplasmosis is a serious hazard of Zoonoses, clinical diagnosis is the key to successful control of the disease. In this paper, the application of the probe, PCR, nucleic acid diagnostic techniques in the diagnosis of Toxoplasmosis were reviewed. Key words: toxoplasmosis; nucleic acid diagnostic techniques ；progress 弓形虫病（toxoplasmosis ）又称弓形体病，世界上 度高是该技术的特点，也因为这些特点使得探针技 除人之外还有近200 多种动物可感染该病，是危害 术在疾病快速诊断方面得到广泛应用。 非常严重的一种人兽共患病。母猪流产、仔猪的发 基于探针检测技术原理，夏爱娣等[1] 应用斑点 热和呼吸困难是猪感染弓形虫后典型临床症状，当 杂交法检测， 功地以1.1kb 的克隆弓形虫DNA 片 猪 发生免疫抑制病与弓形虫混合感染时，将会给 段为探针，检测到病变组织内弓形虫的核酸片段，灵 猪场带来严重的经济损失。染色镜检、速殖子分离、 敏度试验表明，该检测方法最低检出限为500pg 。通 动物接种是传统的弓形虫诊断方法，尽管这些方法 过对克隆基因片段的酶切和电泳分析后，Cristina 在弓形虫病防制中起到重要作用，但耗时时间长、 等[2]发现TGRIE 序列是高度保守，且重复率高的核 方法复杂、方法的特异性和敏感性差、经常容易发 苷酸片段。依据该研究结果，采用32P 标记TGRIE 生误诊等缺点，使其不能很好地在弓形虫病临床诊 序列与弓形虫、小鼠和人的核酸物质杂交。仅有弓 断过程中得到广泛应用。随着对弓形虫基因组和结 形虫虫株DNA 出现杂交反应，表明TGRIE 序列可 构蛋白研究的不断深入，世界各国弓形虫病研究人员 用于作为探针检测弓形虫病。Blanco 等[3] 也从弓形 在弓形虫病分子诊断技术方面做了大量研究工作，取 虫基因组中筛选出了近1000 个拷贝的保守片段，并 得了可喜的研究进展。文章对临床诊断用弓形虫病 以此为探针 功建立了检测弓形虫的DNA 探针检 的探针、PCR 等分子诊断技术研究进展做一综述。 测技术，敏感度分析表明该检测方法的最低检出量 为80pg 的弓形虫DNA。 1 探针技术在弓形虫病诊断中的研究与应用 鉴于长期使用放射性同位素会给环境和使用者 带来危害。非同位素标记探针的应用得到广泛的推 探针技术是基于核苷酸序列互补结合的原理 广应用，进而大大拓 了DNA 探针技术在弓形虫病 而产生的，即用一段已标记单链DNA (或RNA)分 检测方面的应用。通过用地高辛标记的特异性探针 子，与被检测核酸物质中的互补区域进行特异结 与点到硝酸纤维素膜