不同品种猪HSL基因cDNA序列的克隆、测序与序列分析.pdfVIP

不同品种猪HSL 基因cDNA 序列的克隆、测序与序列分析 1 2 1 1 1 1① 雷明刚 , 吴珍芳 , 邓昌彦 , 戴丽荷 , 张振波 , 熊远著 （1.华中农业大学农业部猪遗传育种重点开放实验室, 武汉 430070; 2.华南农业大学动物科学系, 广州 510640 ） 摘 要：激素敏感脂肪酶 （Hormone-sensitive lipase ，HSL ）是负责分解脂肪组织中甘油三酯释放游 离脂肪酸的关键和限速酶，也是影响动物脂肪沉积的关键酶。本文将HSL 基因作为影响猪脂肪代谢和沉 积相关性状的候选基因，对不同品种猪HSL 基因cDNA 全长序列进行了克隆、测序与序列比较分析，并 对不同物种HSL 基因cDNA 序列进行了进化关系分析。研究结果表明：不同品种HSL 基因cDNA 序列 存在20 处碱基变异；猪与人、鼠等其它物种亲缘关系较远，而不同品种猪之间，外来品种之间亲缘关系 较近，而与地方品种亲缘关系较远。 关键词：激素敏感脂肪酶；猪；克隆测序 激素敏感脂肪酶 （Hormone-sensitive lipase ，HSL ）是负责分解脂肪组织中甘油三酯释放游离脂肪酸的 [1,2] 关键酶和限速酶，是调控脂肪组织分解的最关键因素，也是影响动物脂肪沉积的关键酶之一 。哺乳动物 将体内的脂肪酸以甘油三酯的形式储存在脂肪细胞内，激素敏感脂肪酶能水解甘油三酯成甘油和脂肪酸以 满足动物体的需要。HSL基因主要在脂肪组织、肾上腺、卵巢、睾丸、胎盘、巨噬细胞、心脏、骨骼肌和 [1] [3,4] 平滑肌中表达 。HSL基因的cDNA相继从大鼠、小鼠、人脂肪组织和猪中获得 。猪HSL基因全长10~ 11 kb ， [4] 1.1 1.2[5, 6] 包括9个外显子，编码171个氨基酸 ，定位于6p －q ，与定位于猪6号染色体上磷酸已糖异构酶位点、 [6, 7] 血清后白蛋白-2位点、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶位点、氟烷基因邻近或连锁 。现已证明这些基因与猪背 膘厚度、瘦肉率和脂肪含量等性状相关。由于HSL在脂肪代谢中发挥着重要作用和在染色体上所处的位置， 许多研究者认为HSL基因是脂肪沉积和代谢相关性状的重要候选基因[8~ 11] 。 本文将HSL 基因作为影响猪脂肪代谢和沉积相关性状的候选基因，着眼于发现猪HSL 基因的遗传变 异和多态性，对不同品种猪HSL 基因cDNA 序列进行了克隆测序，并进行序列比较分析和物种间进化关系 研究，以寻找猪背膘厚和瘦肉率性状的有效分子遗传标记提供依据。 1材料和方法 1.1材 料 大白猪、长白猪、杜洛克猪、梅山猪取样于华中农业大学试验种猪场和国家家畜工程技术研究中心 精品种猪场；通城猪组织样取自湖北通城种猪场；清平猪组织样取自湖北省当阳畜牧局种猪场。每一品 种猪均采集3 个无血源关系样本。脂肪组织样采取部位为腹部胸颊处。脂肪组织样分割成8-10g 的小块， 用锡箔纸包裹，迅速液氮冷冻，-70℃保存或立即进行RNA 的提取。克隆用载体和菌株分别是pMD 18-T Vector 和大肠杆菌DH5 α。 基金项目：教育部博士点基金项目 （编号：20020504006 ）、国家自然科学基金 （编号：39900 104 ）、国家 “863 ”计划 （编号：2003AA243030 ） 作者简介：雷明刚 (1974 -) ，男，博士，研究方向：动物分子遗传与育种。E-mail: Leimg@ ①通讯作者。熊远著 (1930 -) ，男，教授，院士，研究方向：动物遗传育种。xiongyzh@