猪蓝耳病病毒检测技术研究进展.pdfVIP

瀚———豳 i聪 ，。目_目㈣#∞瓣 疫病防治 猪蓝耳病病毒检测技术研究进展 司庆生高磊王伟(河北省迁安市畜牧水产技术服务中心064400) 摘要：猪蓝耳病俗称猪繁殖与呼吸综合症，是由猪繁殖与呼 定量RT_PCR检测方法。用该方法对组织病料进行检测，并 吸综合症病毒(PR_R．SV)引起的一种严重的病毒性传染病。与常规R1乙PcR做了对比。实验结果表明，所建立的该方法 本文就近年来对该病毒的检测技术，包括病毒分离、聚合酶 并且该方法具有良好的重复性。RT—PCR方法，特异性高， 链式反应、逆转录环介导等温扩增技术(RT—LAMP)等的 研究进展做了阐述。 检测速度快。敏感性高达病毒分离的10倍，并且可以避免 关键词：猪病；PRtLSV；猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒；检潜在散毒．该方法在PRRS群体检测上具有重要的实际价值， 测技术：进展 目前已经广泛应用于PRRSV实验室的检测。 2．3套式PCR技术 1 病毒分离与鉴定 与常规PCR相比较，套式PCR具有更高的敏感性，可 猪繁殖与呼吸综合症病毒的分离培养是从病死猪和死胎 以检出极微量的病毒感染。李和平等人报道，在IⅡ一PCR的 的脾脏和淋巴结，患病仔猪的脾脏和肺脏，母猪的血液，其 基础上通过设计2对引物．建立了PRRSV的套式PCR方法， 它猪可采集肺、脾脏、扁桃体和粪便等病料，病料经处理后 接种细胞进行分离培养．用于分离培养的细胞有猪肺泡巨噬 倍，依然能扩增出相应的片段，多次重复能得到一致的结 果，非PRRSV病毒均未扩增出相应片段。应用该方法对各 细胞(PAMC)、外周血单核细胞、肺血管内巨噬细胞(PIM) 地样品进行检测。表明建立的套式PCR方法适合进行流行病 原代细胞或继代细胞和传代细胞系MARC一145、ATCC— C12621以及HS2H细胞等少数几种细胞上生长。选取含病毒学调查。 量最高的临床样品并且及时送检，是成功分离病毒的关键。 3逆转录环介导等温扩增技术(RT—LAMP) 2聚合酶链式反应 RT—LAMP．即一步反转录环介导等温扩增技术，是一项 新型的核酸扩增技术，经济实用，无需昂贵的检测仪器和专 由于聚合酶链式反应(PCR)具有快速扩增DNA的特 性。作为一种快速、简便、特异的诊断方法，目前为病毒学 业的技术人员。RT—LAMP检测方法与以往的检测方法相比 诊断、分子生物学实验最常用的技术，其优点为敏感、特 具有诸多优势：可以快速、准确、灵敏的检测到PRRSV的 异、快速、准确。在PCV的检测方面应用广泛，且发展了很 经典株、疫苗株和变异株。核酸链通过在等温环境条件下的 多改良的技术。 循环置换扩增实现对靶序列的放大，2007年深圳检验检疫局 RT—LAMP和压电免疫蛋白传感器快速新型技 2．1多重PCP,．技术 完成了PRRsV 术研究。U等根据PRRSVORF6基因，设计了3对引物，建 何丹等建立了一