副猪嗜血杆菌安徽分离株与耐药性与转铁结合蛋白A免疫原性研究.pdf

摘要 副猪嗜血杆菌(胁P肌叩办玎淞p口r伽”括，HPS)是猪上呼吸道的一种共栖菌，在特 定条件下可侵入机体而引起严重的以多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎、肺炎、高热及 高死亡率为主要特征的全身性疾病，被称为副猪嗜血杆菌病或革拉斯氏病(Glasser·s disease)。该病已经成为影响全球养猪业最为严重的细菌性传染病之一，给养猪业造 成了重大经济损失。副猪嗜血杆菌目前已知的血清型有15种，且有大量无法定型的 菌株，各型菌株间的毒力差异及致病性差异都很大，且各血清型之间缺乏有效的交叉 保护力。此外，HPS的毒力因子尚未完全被定义，这些都为Glasser’sdisease的防控 及其疫苗的研制带来了很大困难。因此，开展HPS的相关研究对Glasser．sdisease的 防控就具有重要的现实意义。本研究的主要内容是：①探讨安徽地区HPS分离株的 耐药性及其与细菌毒力和血清型、基因型之间存在的关系，为Glasser’sdisease的治 疗和防控提供科学依据；②探讨TbpA蛋白的免疫保护作用，为HPS新型亚单位疫 苗的研制奠定理论基础。本研究内容包括以下部分： 1．安徽地区副猪嗜血杆菌的血清型及基因型多态性 EⅪC．PCR将24株肿S分为1 1个基因型，其中Ⅳ为优势血清型，占20．83％(5／24)， 20．83％(5／24)；不能进行血清学分型的菌株均能够得到有效地基因分型。 2．副猪嗜血杆菌耐药性研究 的敏感性，同时运用PCR技术检测了分离株中28种耐药基因的分布情况。 结果显示，所有菌株对左氟沙星、头孢氨苄、头孢唑林钠、头孢氨噻肟、头孢曲松 钠、红霉素、阿奇霉素、庆大霉素、壮观霉素、氟苯尼考、均loo％敏感；敏感率较 氧氟沙星、恩诺沙星、头孢拉定、丁胺卡那的敏感率均为(83．3％)；甲氧苄啶和强力 霉素的敏感率均为75％；复方新诺明和链霉素的耐药率分别高达58．3％和54．2％；其 1．2种药物，66．7％的菌株至少对3种或3种以上的药物不敏感，20．8％的菌株至少对 5种药物不敏感，有l株(4．2％)可以耐受7种药物。 运用PCR技术检测了副猪嗜血杆菌分离株的28种耐药基因。24株副株嗜血杆菌 种耐药基因检测，均共检测出13种耐药基因。耐药表型测定结果与耐药基因检测结 果基本一致。 24株肿S中以血清学4型最为流行，其次为14型和13型，其耐药率分别是14．3％、 9．7％、O％。虽然不同血清型间的耐药率相差较大，但由于受检菌株数量的有限，以 及大量未定型菌株的存在，使得无法探究肿S的耐药性与其血清型之间的相关性。 其耐药率分别为19．9％ RFLP分型中的优势血清型为DBP(37．5％)和BBB(20．83％)， 和10％。结果表明，优势血清型的菌株耐药性相对较强。比较不同时期的临床分离株 对药物耐药性的变化趋势，可见HPS的耐药谱正逐渐拓宽，多重耐药现象也日益严 重。 3．HPS转铁结合蛋白A基因的克隆、表达及其对豚鼠的免疫保护效力研究 反应性。将纯化后的重组蛋白加佐剂乳化分别于第1天、20天免疫豚鼠，以ELISA 方法检测免疫前、后豚鼠rTbpA抗体滴度。在首免及二免后，试验组重组TbpA抗体 滴度都有升高。Real．timePCR检测二免后血液中细胞因子表达水平的变化，结果显 13型的HPS以致死剂量分别对重组TbpA蛋白免疫组及对照组的豚鼠进行腹腔攻毒， 结果表明重组TbpA蛋白对相同血清型的菌株具有较好的免疫保护力，对不同血清型 的菌株也具有一定的交叉保护力。 关键词：副猪嗜血杆菌，耐药性，转铁结合蛋白A，克隆表达，免疫保护效力 Abstact acommensal 月韶朋嘞玎淞p口r船”西is ofthe o唱anism upper of respirato巧tract pigs， butunder conditionscan