单纯疱疹病毒抗原快速诊断试剂盒的研制及其初步临床应用.pdfVIP

256 单纯疱疹病毒抗原快速诊断试剂盒的 研制及其初步临床应用 张树文1刘光明2张津萍1沙仲1尢永燕1 南京 210042 (I．中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所 2．南京黎明生物制品有限公司) Virus。HSV)属 单纯疱疹病毒(HerpesSimplex 1．4病人标本标本来自本所2010年1月一3月 于人类疱疹病毒d亚科，是DNA双链病毒，人类是问的皮肤性病门诊就诊患者。人选标准如下：(1)年 其唯一自然宿主。根据其抗原性质的不同，可分为 龄15—60岁；(2)具有生殖器部位或头面躯干其它部 HSV一1型及HSl卜2型，两者之间的基因同源序列约位的皮肤或粘膜损害，如水疱、脓疱、溃疡、糜烂、 为50％。HSv-I多感染口，面。眼等腰以上部位，而结痂、红斑、裂隙等，另有部分标本取自尿道炎、宫 HSV二2则通常感染生殖器及肛周等腰以下部位。疱 颈糜烂、尖锐湿疣、念珠菌性龟头炎等患者；(3)近 疹的典型临床表现为皮肤粘膜上出现集簇性水疱、 1周内未服用过抗病毒药，皮损局部未使用过外用 脓疱、溃疡及结痂。 药。符合上述标准的病人，在询问病史及体格检查 生殖器疱疹(Genital 后，用拭子擦取水疱、脓疱液或溃疡、糜烂基底面 herpes)是由单纯疱疹病 毒感染泌尿生殖器及肛门部位皮肤粘膜而引起的 渗出液，置干燥塑料管中。 一种常见性传播疾病。在生殖器疱疹的病原体中， 1．5对照试剂 中IJJ大学达安基因股份有限 HSv．．2型约占80％，HSV—l型约占10。40％。公司单纯疱疹病毒I型核酸扩增(PCR)荧光定量测定 近年来，生殖器部位溃疡性疾病的发病率大幅 试剂盒和单纯疱疹病毒II型核酸扩增(PCR)荧光定 上升。其中，可供临床普遍应用的疱疹诊断试剂非 量测定试剂盒。按试剂盒说明书进行操作。 常缺乏。目前，疱疹的诊断仍主要依靠医生的临床 2方法 经验，或通过排除梅毒的实验诊断方法来进行问接 2．1疱疹抗尿陕速诊断试剂盒的制备 诊断，误诊率较高，常延误患者的及时准确治疗。 2．1．1用彩色乳胶颗粒对疱疹抗体进行标记 因此，研制出一种快速、准确、简便的疱疹抗原 快速诊断试剂盒具有非常重要的临床意义和社会 l％的终浓度，加入疱疹抗体使抗体终浓度为0．1mg／ 效益。本研究利用抗单纯疱疹I型及II型的单克隆抗 ml；4。C反应过夜；加入终浓度为l％的BSA封闭l／J 体和彩色乳胶免疫层析技术，研制开发出了一种疱 时。离心，去上清，沉淀用含O．1％BSA的0．01mol／L、 疹抗原快速诊断试剂盒，并初步评价了其在临床应 pH7。4的PBS复溶，置于4℃备用。 用中的价值。 2．1．2 1材料 抗鼠多克隆抗体和疱疹抗体稀释至合适的浓度，用 1．1 抗体 鼠源抗单纯疱疹I型和II型单克隆 点膜机分别喷点在硝酸纤维素膜的质控区和测试 抗体由南京黎明生物制品有限公司提供。羊抗鼠 区。37℃烘干2：b时，密封保存于室温备用。 IgG抗体购自美国Arista公司。 2．1．3 点乳胶用含0．1％BSA的0．01m01／L、 1．2试剂和耗材彩色乳胶颗粒购自Merck公 pH7．4的PBS将2．1．1步骤中标记好的乳胶抗体结合 司。硝酸纤维素膜和玻璃纤维购／!t 物稀释至合适浓度。喷点在玻璃纤维上，37℃烘干2