传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统构建.pdfVIP

第38卷 第5期 淡 水 渔 业 2008年 9月 Vo1．38 No．5 FreshwaterFisheries Sep．2008 传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的 干酪乳杆菌表达系统构建 刘 敏，赵丽丽，葛俊伟，欧 笛，王相清，刘 弈，张 伟，李一经 (东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨 150030) 摘要：根据传染性胰腺坏死病毒 (IPNV)VP3蛋白的全基因序列，设计并合成引物，以IPNV(ATCCVR一1318)细 胞培养毒提取的核酸为模板 ，对传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统进行了构建研究。结果显 示：进行RT—PCR扩增得到截短的VP3基因约615bp目的片段，将其克隆到pMD18一TSimple载体，经酶切、 PCR扩增和序列测定后显示 目的片段正确；将 目的片段分别亚克隆到乳酸菌细胞表面表达型载体和分泌表达型 载体 ，电转化于干酪乳杆菌，获得了阳性重组菌株。结果表明，通过本实验方法可构建表达传染性胰腺坏死病 毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统，为实现IPNVVP3蛋白在乳酸菌中的表达及免疫原性研究奠定了基础。 关键词：传染性胰腺坏死病毒；VP3基因；干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)；表达载体系统 中图分类号：$943．122 文献标识码：A 文章编号：1000-6907一(2008)05-0030-05 ConstructionofExpressionSystem ofInfectiousPancreas NecrosisVirusVP3Protein inLactobacilluscasei LIUMin，ZHAOLi—li，GEJun-wei，OUDi，WANGXiang—qing，LIUYi，ZHANGWei，LIYi-jing (CollegeofAnimalScienceandTechnology，No~hemtAgriculturalUniversity，Harbin 150030) Abstract：Infectiouspancreaticnecrosis(IPN)virus，theturncatedgenefortheviralcapsidprotein(VP3)，anapproxi— mately615bpsfragmentofIPNVgeneVP3thatencompassesthemajorantigenicdomainscriticalofrneutralization．was clonedintotheLactobacilluscaseivectorspPG1andpPG2，andtransformedintoL．casei393byelectroporation，resulting in recombinantplasmidspPG1一VP3 and pPG2-VP3．The recombinantplasmidswere detected by plasmid extraction． PCR，restrictionenzymesdigestandsequencesanalysis．Theresultindicatedthatatruncatedform ofVP3ofIPNVhadin— sertedintotheexpressionvectorsandachievedLactobacilluscaseiexpressionsystems． Ithadelectedthebaseofrtheex— pressionofIPNVVP3proteininL．caseiandtheproductionoforalvaccination． Keywords：IPNV ；VP3gene；Lactobacilluscasei；expressionalvectorssystem 传染性胰腺坏死病病毒 (Infectiouspancreas 是一种双股RNA病毒，基因组含有两个双链 RNA