稻曲病菌PMK1类同源基因克隆及在稻瘟病菌遗传互补中的功能验证.pdfVIP

l111-~ 微生物学报ActaMicrobiologicaSinica 48(11)：1473~1478；4November2008 ISSN0001-6209；CN11—·1995／Q http：／／journals．im．ac．cn 稻曲病菌PMK1类同源基因克隆及在稻瘟病菌 遗传互补中的功能验证 张震，杜新法，柴荣耀，王教瑜，邱海萍，毛雪琴，孙国昌 (浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所，杭州 310021) 摘要：【目的】克隆稻曲病菌PMK1类MAPK (Mitogen—activatedproteinkinase)同源基因。【方法】 根据丝状真菌 MAPK 蛋白保守性设计简并引物扩增稻曲病菌 MAPK基因部分片段，进而利用 TAIL—PCR进行染色体步移和 RT-PCR获得 UVMK1基因全长和cDNA全长。构建互补载体，交叉互 补稻瘟病菌APMK1突变体菌株nn78进行功能验证，包括附着胞分化和致病性测定。【结果】UVMK1 基 全长 1435bp，包含 3个内含子，编码 355氨基酸的蛋白。UVMK1推导蛋白与丝状真菌 MagnaporthegriseaPMK1，Fusarium oxysporum FMK1，Fusarium solaniFSMAPK ，Colletotrichum lagenariumCMK1，BotrytiscinereaBMK1，ClavicepspurpureaCMPK1等编码蛋白高度同源。转化 稻瘟病菌菌株nn78，获得 5个转化子。其中选取的转化子恢复了稻瘟病菌正常的附着胞分化和对大 麦叶片的致病能力。【结论】本研究成功分离了首个稻曲病菌 MAPK基因，而且 UVMK1基因是稻 瘟病菌PMK1的同源基因。 关键词：稻曲病菌 ；UVMK1；稻瘟病菌 ；MAPK 中图分类号：Q786，Q936 文献标识码：A 文章编号：0001．6209(2008)11—1473．06 水稻稻曲病是由稻绿核菌[Ustilaginoideavirens 种 1【驯，MAPK信号途径的研究开展较为深入，已鉴定 (Cooke)Tak]~JI起的水稻穗部真菌病害。病害的发生 的3个关键基因 PMK1，MPS1和 OSM1，参与了病 往往使得邻近谷粒垩白质和病穗粒重下降，造成水稻 原菌的发育、分化和致病过程[9】。基于这些研究结果， 产量的损失；同时病粒可产生对人畜有害的毒素，混 推测稻曲病菌在侵染水稻花器的过程中MAPK信号 杂于谷粒中影响稻米的品质 l【I2】。目前国内外对稻曲 途径同样起着重要作用。根据 MAPK蛋 白高度同源 病的研究尚停留在病害防治、侵染循环和种群结构等 的理论，本研究采用简并引物和染色体步移的策略克 研究范 ，且研究进展缓慢。鉴于稻曲病在水稻 隆了稻曲病菌PMK1类MAPK同源基因，并利用稻瘟病 生产中的潜在危害性，逐步开展稻曲病菌分子生物学 菌APMK1突变体交叉互补进行了功能验证。 研究，有利于加深对稻曲病菌致病机制的认知程度。 MAPK (Mitogenactivatedproteinkinase)在真核 1 材料和方法 生物中是一类非常保守的丝氨酸／苏氨酸蛋白，与胞 1．1 材料 外信号传导相关，可以将环境信号或发育信号传递给 1．1．1 主要试剂和仪器：Trizol为Invitrogen公司产 细胞核，引发特异基因的表达f】。在许多植物病原真菌 品；普通 TaqDNA聚合酶、各种限制型内切酶、RNA 中，MAPK基因在侵染早期发挥重要的作用[9~13】。稻瘟 PCRKit为TaKaRa公司产品；HybondMT．N+尼龙膜 病菌 (Magnaporthegrisea)作为病原真菌研究模式物