高效除磷工程菌Pseudomonas putida GM6-PPK1的构建及其除磷能力研究.pdfVIP

高效除磷工程菌n2跣如耽D挖伽p扰fz如GM6一PPKl 的构建及其除磷能力研究① 李 波， 刘卫东， 刘 娟， 赵晓丽。 高雅英， 曹 慧。 崔中利‘ (南京农业大学生命科学学院。农业部农业环境微生物工程重点开放实验室，南京2l0095) 摘要：卢础，基因编码的多聚磷酸盐激酶主要负责多聚磷酸盐的合成，其表达量的高低直接决定聚磷菌的聚P能力 的强弱。胁“dD脚口糨删f缸妇GM6是从EBPR好氧池活性污泥中分离获得的一株具有聚P能力的菌株．该菌株含有两个编 码多聚磷酸盐激酶的基因(础，和助腔)。通过PCR从高效聚磷菌株总DNA中扩增得到了声嘶，及其启动子．并定向克 移到原始菌株GM6中，获得的工程菌P pl|砌2 提高了54％。生长能力较原始菌株也有一定增强。通过模拟EBPR工艺，发现GM6．PPKl在厌氧，好氧交替的环境条件下 强化表达不但提高了菌体好氧段的吸P能力，而且厌氧段P的释放和P队的合成较之原始菌株也有显著增加． 关键词： 强化生物除磷；多聚磷酸盐；多聚磷酸盐激酶；基因工程菌 中图分类号：S154．39 近年来，我国的江河、湖泊及近海海域的N、P污 染尤其是P污染日趋严重，导致水华、赤潮频繁发生， ADP，p础J是polyP合成的关键基因，其表达量的 给工农业生产和人们的生活带来了严重的影响。目前， 高低直接影响P：Aos聚P能力的强弱，从而影响到 强化生物除P工艺(eIlll锄ced 菌体内PHA含量的变化。 biologicalphosphoms removal，EBPR)是大规模污水处理厂常用的废水除P 方法【¨。EBPR的机理是通过厌氧和好氧交替运行使实验室从EBPR好氧池活性污泥中分离获得的一株 高效聚P菌株【71，该菌株含有两个编码多聚磷酸盐 得聚磷菌(phosphomSacc啪uIatingorganisms，PAOs) 在厌氧条件下分解多聚磷酸盐(polyphosphate，polyP)激酶的基因(即七，和即船)。有研究证实即七J是从 一个独立的启动子开始转录的基因，这个基因不但具 的同时聚集聚羟基烷酸(polyhydroXyalkalIoate，PHA)， 在好氧条件下分解PHA聚集polyP，从而使菌体内有高效的催化polyP合成的能力，还能够对环境胁 含有超量的P，随污泥排放而达到除P的目的121。该迫作出响应IsJ。由于PPK有多聚磷酸盐合成的重要 工艺除P的关键就在于聚磷菌在厌氧／好氧交替的环 作用，本研究通过印七，编码的多聚磷酸盐激酶强化 表达提高菌体聚P能力的途径成功构建了高效除P 境中将无机磷酸盐转变为polyP达到“超量吸P”的 效果。显然，EBPR系统中聚磷细菌通过在交替厌氧／工程菌。 好氧环境中利用体内的p01yP与PHA之间物质和 1材料与方法 能量的转化达到磷酸盐的去除作用【2弓】。一般认为，大 1．1供试材料 多数微生物有机体内polyP的水平由两种酶共同调 1．1．1 菌株和质粒 本试验所使用的菌株和质粒 节：多聚磷酸盐激酶(PPK)和多聚磷酸盐酯酶(PPX) 参见表l。 【4喝】。其中PPK催化一个可逆反应将ArP中的P转变 ①基金项目：教育部新世纪优秀人才计划项目资助． ‘通讯作者(czI@nj硼．edu．∞) 作者简介：李波(1982一)．男，山东人，硕士研究生．主要从事环境微生物工程方向研究。B眦il：2005116026刨¨．edu．锄 万方数据 第4期 李波等：高效除磷工程菌nP“如小D，“up“舭幻GM6-PPKl的构建及其除磷能力研究 表l 供试菌株和质粒