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·1644 · 药学学报 ActaPharmaceuticaSinica2014，49(12)：1644—1649 影响毕赤酵母高效表达重组蛋 白的主要因素及其研究进展 王庆华，高丽丽，梁会超，巩 婷，杨金玲 ，朱 平 (中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所，天然药物活性物质与功能国家重点实验室， 卫生部天然药物生物合成重点实验室，北京 100050) 摘要：毕赤酵母是现代分子生物学研究中最重要的重组蛋白表达系统之一。该系统具有表达水平高、遗传 稳定性好、可分泌表达、易于高密度发酵和成本低廉等优点。影响重组蛋白在毕赤酵母中高效表达的主要因素 有基因拷贝数、密码子偏爱性、启动子、分子伴侣、信号肽、糖基化修饰和发酵工艺等。本文对影响毕赤酵母 高效表达的主要因素及其研究进展进行综述，为进一步提高重组蛋白在毕赤酵母中的表达水平提供借鉴。 关键词：毕赤酵母；表达系统；重组蛋 白；基因表达；分子伴侣 中图分类号：R931 文献标识码：A 文章编号：0513．4870(2014)12．1644．06 Researchadvancesoftheinfluencefactorsofhighlevel expressionofrecombinantproteininPichiapastoris WANGQing—hua，GAOLi—li，LIANGHui—chao，GONGTing，YANGJin—ling，ZHUPing (StateKeyLaboratoryofBioactiveSubstanceandFunctionofNaturalMedicinesandKeyLaboratoryofBiosynthesisof NaturalProduc~ofNationalHealthandFami~PlanningCommission，InstituteofMateriaMe~ca,ChineseAcademyof MeScalSciencesandPekingUnionMeScalCollege,Beijing100050,China) Abstraet：PichiapastorisISoneofthemostimportantsystemsused inthefieldofmolecularbiologyfor theexpressionofrecombinantproteins． Thesystem hasadvantagesofhighexpression，high stability,high secretion，easyhigh—density fermentation and low cost． M any factorsaffectthe expression ofrecombinant protein，suchasgenecopynumber,codonusagepreference，typeofpromoter,molecularchaperones，glycosylation， signalpeptideandfermentationprocess． Inthisreview，researchadvancesoftheaboveaspectsaresummarized， whichlayafoundationforimprovingtheexpressionofrecombinantproteinsinP．pastoris． Keywords：Pichiapastoris；expressionsystem；recombinantprotein；geneexpression；molecularchaperones 毕赤酵母 (Pichiapastoris)是单细胞真核生物， 源基因通过 同源重组整合到宿主基因组上，工程菌 它既具有原核生物易于培养、繁殖快和便于基因工程 株遗传稳定性好：重组蛋白可分泌表达，而内源蛋白 操作等特性，同时又具有真核生物对基 因产物正确 极少分泌，重组蛋 白分离纯化非常方便；毕赤酵母已 折叠及翻译后加工及修饰能力，所 以毕赤