戊型肝炎病毒多拷贝重组质粒的构建及在毕赤酵母中的表达.pdfVIP

微生物学免疫学进展 2014年 12月第42卷第 6期 ProginMicrobiolImmuno1 ． Dec．2014．Vo1．42No．6 ·31 · · 论 著 · 戊型肝炎病毒多拷贝重组质粒的构建 及在毕赤酵母 中的表达 郭敏，雷清，刘晓，蒋琳 兰州生物制品研究所有限责任公司，甘肃省疫苗工程技术研究中心 ，甘肃 兰州，730046 摘要：目的 体外构建戊型肝炎病毒(HEV)ORF2。一∞多拷贝重组表达质粒，以提高 HEVORF2 一 在毕赤酵母 中的表达水平。方法 采用 PCR技术扩增 目的基 因 ORF2：一66o( ，然后将 ORF22一 (E1同义点突变为 ORF2。8 一 ，构建重组表达质粒 ORF2128-66o／pAO815(单拷贝)，BamHI和 BgllI双酶切获得的 目的基因表达盒 (AOX—ORF2l28—660)插入去磷酸化的质粒 ORF228—660／pA0815，得到2(AOX—ORF2m一660)／pA0815(2拷贝)质粒。重 复上述方法依次构建3(AOX—ORF2。：一66o)／pAO815(3拷贝)、4(AOX—ORF228一 )／pAO815(4拷贝)等多拷贝重组 质粒。得到的多拷贝重组质粒电转化毕赤酵母菌 GS115，甲醇诱导表达，SDS—PAGE分析比较不同拷贝数转化子的 表达产量 ，ELISA检测表达产物的生物活性。结果 构建了戊型肝炎病毒(HEV)ORF2 一 多拷贝重组表达质粒 ， 表达的目的蛋 白相对分子质量约为 59000，4拷贝重组质粒表达水平高于其他拷 贝数重组质粒表达水平。 结论 成功构建了HEVORF2 一彻 多拷贝表达质粒，提高了其在毕赤酵母中的表达水平。 关键词：戊型肝炎病毒；多拷贝表达盒 ；同义点突变；毕赤酵母 ；pAO815载体 中图分类号：Q786 文献标志码：A DOI：10．13309／j．cnki．pmi．2014．06．006 Construction ofmultiplecopyexpressioncassetteand expression ofgeneHepatitisE virusORF2l28 inpichiapastoris — 66o GUOMin，LEIQing，LIUXiao，JIANGLin LanzhouInstituteofBiologicalProductsCo．Ltd，CenterforGansuProvincialVaccineEngineeringResearch， Lanzhou730046，GansuProvince，China Correspondingauthor：J1ANGLin，E—mail：jianglin620@sohu．corn Abstract：Objecfive ToconstructthemultiplecopyexpressioncassetteforHepatitisEvirusgenel28—660andimprovethe expressionlevelofgene inpichiapastoris．M ethods AmplifyHEV ORF2l28— 660fE1usingPCR technology，then mutate ORF2l28— 660，consturctrecombinantplasmidORF2128—66o／pA0815anddigest