福建省放线菌结瘤植物共生菌Frankia遗传多样性研究.pdfVIP

微生物学报ActaMicrobiologicaSinica 48(11)：1432-1438；4November2008 ISSN0001—6·209；CNll··1995／Q http：／／journals．im．ac．crl 福建省放线菌结瘤植物共生菌Frankia遗传多样性研究 李志真 (福建省林业科学研究院，福州 350012) (福建师范大学地理学博士后流动站，福州 350007) 摘要：【目的】了解福建省放线菌结瘤植物共生固氮菌Frankia的遗传多样性。【方法 】利用 16S．23S rDNA间隔区 (rrn)和n厂)【一K基因间隔区的PCR扩增和RFLP技术 ，分析了福建省木麻黄、杨梅 、 桤木、胡颓子等共生Frankia纯培养菌株的遗传差异。【结果】17个菌株获得 rrn扩增片段，2个杨 梅菌株和 1个胡颓子菌株扩增未成功，酶切图谱经聚类分析表明6个地点的细枝木麻黄、短枝木麻 黄、粗枝木麻黄 12个共生 Frankia菌株同源性高，属于一个类群 ，2个地点的4个杨梅菌株和 1个 四川桤木菌株亲缘关系近，为另一类群。25个Frankia菌株的nifD．K基因间隔区PCR．RFLP分析结 果显示，7个地点的3种木麻黄 14个菌株聚类为一个类群，4个地点的7个杨梅菌株、2个地点的2 个四川桤木菌株以及 1个台湾桤木菌株聚类为另一个类群，胡颓子菌株则为独立的类群。【结论】研 究结果表明福建省共生Frankia遗传多样性丰富。 关键词：Frankia；PCR；RFLP；IGS16S一23SrDNA；IGSny／D．K；遗传多样性 中图分类号：Q939 文献标识码：A 文章编号：0001．6209(2008)11．1432．07 福建省放线菌结瘤植物资源丰富，自然分布与引 广泛应用于各种微生物的分子遗传 、分类鉴定、系统 进种植的约 4科 4属 29种 1【J，如沿海防护林主要树 发育等研究 ¨，]。在我国，利用 16SDNA和，z矿基 种木麻黄，果树杨梅，造纸原料树种桤木等。这些固 因等分子技术对北方生长的沙棘 (Hippophaerham． 氮植物分布广泛，适应性强，在提高土壤肥力、促进 noides)、黄果沙枣 (Elaeagnusoxycarpa)、色赤杨 植物生长、改善生态环境等方面发挥着重要作用。因 (Alnustinctoria)、毛赤杨 (A．hirsuta)、细枝木麻黄 此，开展放线菌结瘤植物的共生固氮研究有着重要的 (Casuarinaf ，2 a ，2a)、短枝木麻黄 (C． 理论意义和广阔的应用前景。 equisetifolia)以及云南旱冬瓜 (A．nepalensis)、浙江 放线菌结瘤植物共生菌Frankia分类 ，目前公认 杨梅(Myricarubra)等少数共生Frankia的遗传多样 至 “属”，尚无法进行 “种”的划分[2,31。许多学者从 性进行了研究¨3刚。为了深入了解福建省放线菌结瘤 FrⅡnkia的形态特征 1、生理特性 、可溶性蛋 白[51、 植物共生 Frankia的遗传差异，本文利用 16S一23S 同功酶 1、免疫学1、宿主特异性扪、DNA同源性叭、 rDNA 间隔区和固氮基因nf／O—K间隔区为分子指标， 基因组限制酶切图谱Uol等诸多方面进行了分析，由于 对福建省不同生境条件下生长的主要放线菌结瘤植 研究菌株数量有限，培养过程易发生变异，迄今为止 物共生Frankia菌株进行了PCR扩增和 RFLP分析， 仍无有效的定种方法。近年来，16SrDNA、16S．23S 以期明确福建省 Frankia的种群多样性，为 Frankia rDNA 间隔区序列以及 nf／基因作为一种分子标记， 的分类鉴定提供参考。 基金项目：福建省科技厅 自然基金项 目(B993001)；国家林业局南